文献类型：期刊文章

作　　者：李敏英[1] 王楚彤[1] 袁美丽[1] 卢思彤[1] 钱中清[1,2] 李柏青[1,2] 许涛[3] 汪洪涛[1,2]

LI Minying;WANG Chutong;YUAN Meili;LU Sitong;QIAN Zhongqing;LI Baiqing;XU Tao;WANG Hongtao(Anhui Province Key Laboratory of Immunology in Chronic Diseases;Department of Immunology,School of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College;Department of Clinical Laboratory Diagnostics,School of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China)

机构地区：[1]慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室 [2]蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室 [3]蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室,安徽蚌埠233030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405)。

年　　份：2022

卷　　号：38

期　　号：9

起止页码：789-793

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。

关 键 词：绿色荧光蛋白(GFP)  耻垢分枝杆菌 结核病

分 类 号：R378.911] R825.2[基础医学类] R392.12