文献类型：期刊文章

作　　者：樊珍[1,2] 王丽芳[2,3] 王立伟[4] 陈丽新[4] 张海峰[2]

FAN Zhen;WANG Lifang;WANG Liwei;CHEN Lixin;ZHANG Haifeng(Department of Psychology,Xi an Mental Health Center,Xi an 710061,China;Institute of Genetics and Development,Translational Medicine Institute,Xi an Jiaotong University,Xi an 712000,China;Institute for Evidence-Based Medicine,Xi an 710003,China;Department of Physiology,School of Medicine,Jinan University,Guangzhou 510632,China)

机构地区：[1]西安市精神卫生中心心理科,陕西西安710061 [2]西安交通大学转化医学研究院遗传与发育研究所,陕西西安712000 [3]西安循证医药研究院,陕西西安710003 [4]暨南大学基础医学院生理学系,广东广州510632

出　　处：《空军军医大学学报》

基　　金：国家自然科学基金(81402312);中央高校基本科研业务费专项基金(xjj2018158);中国博士后科学基金(2014M552462)。

年　　份：2022

卷　　号：43

期　　号：6

起止页码：720-724

语　　种：中文

收录情况：CAS、普通刊

摘　　要：目的构建水通道3(AQP-3)/血凝素(HA)融合标签载体,使用原子力显微镜(AFM)观察AQP-3在细胞膜的分布。方法采用重叠聚合酶链反应(PCR)法将AQP-3/HA标签基因克隆到AQP-3的DNA序列中,构建真核表达载体,挑取单克隆菌落PCR初步鉴定后进行测序鉴定;质粒转染细胞后,采用免疫荧光标记HA标签蛋白,激光共聚焦显微镜下观察荧光标记并拍照;胶体金标记转染成功的细胞上HA标签,AFM观察胶体金颗粒从而分析AQP-3蛋白分布。结果将HA标签蛋白插入AQP-3第二个胞外段,即T149-Y150之间,成功构建了融合表达载体pIRES2-AQP3/HA-EGF;共聚焦显微镜观察到转染成功的细胞发绿色荧光,AQP-3/HA融合蛋白呈蓝色荧光,其主要分布于细胞膜;AFM观察到细胞表面凹凸不平并伸出片状伪足和丝状伪足,AQP-3/HA在细胞膜表面分布有差异性,其在突起部位分布较多。结论将HA标签插入AQP-3第二个胞外段,可减小对其功能影响,联合胶体金和AFM识别HA标签蛋白,能够实现AQP-3在细胞膜的示踪标记。

关 键 词：原子力显微镜 水通道 细胞突起  胶体金

分 类 号：R331] Q241[基础医学类]