文献类型：期刊文章

作　　者：刘文洁[1] 尹雪云[1] 王红[2] 陈静燕[3] 单凯悦[1] 陈怀龙[1] 张高峰[1] 王明山[1] 董瑞[1]

Liu Wenjie;Yin Xueyun;Wang Hong;Chen Jingyan;Shan Kaiyue;Chen Huailong;Zhang Gaofeng;Wang Mingshan;Dong Rui(Department of Anesthesiology,Affiliated Qingdao Municipal Hospital of Qingdao University,Qingdao 266071,Shandong,China;Department of Education and Training,Affiliated Qingdao Women and Children's Hospital of Qingdao University,Qingdao 266034,Shandong,China;Qingdao Medical College of Nanjing Medical University,Qingdao 266071,Shandong,China)

机构地区：[1]青岛大学附属青岛市市立医院麻醉科,山东青岛266071 [2]青岛大学附属青岛市妇女儿童医院教育培训科,山东青岛266034 [3]南京医科大学青岛临床医学院,山东青岛266071

出　　处：《中华危重病急救医学》

基　　金：国家自然科学基金(82001132);山东省自然科学基金(ZR2021MH365)。

年　　份：2022

卷　　号：34

期　　号：8

起止页码：842-847

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨M1型小胶质细胞源性外泌体(M1-exo)对氧糖剥夺/复氧后神经元损伤的影响,并研究其作用机制。方法取对数期生长的小鼠小胶质细胞BV2,加入100μg/L脂多糖(LPS)和20μg/Lγ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞极化为M1表型,通过蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)、实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光法鉴定M1型小胶质细胞。收取M1型小胶质细胞的上清液,用ExoQuick-TCTM试剂盒提取M1-exo,通过透射电镜及纳米颗粒粒径分析(NTA)观察外泌体形态,采用Western blotting法检测外泌体标记蛋白白细胞分化抗原(CD9、CD63)的表达。将生长良好的小鼠神经母细胞瘤细胞N2a分为6组:C组细胞常规培养;O组氧糖剥夺3 h后复糖复氧24 h制备N2a细胞氧糖剥夺/复氧损伤模型;E组的N2a细胞氧糖剥夺3 h后复糖复氧并与M1-exo共培养24 h;NC组、M组和I组分别构建阴性对照、过表达和敲低微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)的M1-exo,通过qPCR检测转染是否成功。NC组、M组和I组N2a细胞氧糖剥夺3 h后,与转染后的M1-exo共培养24 h后检测各项指标。采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用qPCR法检测miR-20a-5p表达。结果与M0型小胶质细胞相比,M1型小胶质细胞特异性标志物CD32和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)荧光强度及其mRNA和蛋白表达均明显升高〔CD32(荧光强度):36.919±1.541比3.533±0.351,CD32 mRNA(2^(-ΔΔCt)):4.887±0.031比1.003±0.012,CD32/β-actin:2.663±0.219比1.000±0.028;iNOS(荧光强度):29.513±1.197比7.933±0.378,iNOS mRNA(2^(-ΔΔCt)):4.829±0.177比1.000±0.016,iNOS/β-actin:1.991±0.035比1.000±0.045;均P<0.01〕,证明M1型小胶质细胞被成功激活。电镜下可见M1-exo为圆形或卵圆形囊泡状小体,并有明显膜性结构,直径范围约100 nm。Western blotting结果显示,M1-exo表达特异性CD63和CD9蛋白。与C组比较,O组N2a细胞活力明显下降,细胞凋亡率和miR-20a

关 键 词：氧糖剥夺/复氧  外泌体 实时荧光定量聚合酶链反应  CD63 膜性结构 小胶质细胞 白细胞分化抗原  微小RNA  

分 类 号：R741]