文献类型：期刊文章

作　　者：李宛生[1] 李敏华[2] 张洪亮[1] 李超[1] 许浒[1] 付军[1] 龚帮俊[1] 郭镇洋[1] 刘建波[1] 彭金美[1] 周国辉[1] 王倩[1] 田志军[1]

LI Wan-sheng;LI Min-hua;ZHANG Hong-liang;LI Chao;XU Hu;FU Jun;GONG Bang-jun;GUO Zhen-yang;LIU Jian-bo;PENG Jin-mei;ZHOU Guo-hui;WANG Qian;TIAN Zhi-jun(National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology/Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150069,China;Beijing IDEXX Yuanheng Laboratories,Co.,Ltd,Beijing 101318,China)

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069 [2]北京爱德士元亨生物科技有限公司,北京101318

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：黑龙江省自然科学基金优秀青年项目(YQ2019C032);兽医生物技术重点实验室自主研究课题(SKLVBP202122)。

年　　份：2022

卷　　号：44

期　　号：8

起止页码：842-849

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2021_2022、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为研制一种快速检测北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的免疫层析试纸条(ICS),本研究以红色乳胶微球偶联的PRRSV N蛋白单克隆抗体(MAb)1H4为检测抗体,并包被在结合垫上,以MAb 1H4和羊抗鼠IgG为捕获抗体,并分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,经各反应条件的优化建立了检测PRRSV的乳胶微球ICS。各反应条件优化结果显示,乳胶微球偶联的MAb即检测抗体浓度为1.5 mg/mL,检测线MAb即检测线捕获抗体的浓度为2.0 mg/mL,质控线羊抗鼠IgG即质控线捕获抗体的浓度为1.0 mg/mL。特异性试验结果显示,该方法可特异性检测我国出现的高致病性、NADC30-like、NADC34-like等北美型PRRSV代表株,与欧洲型PRRSV DV疫苗株及猪的其他常见病毒(CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PPV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对系列稀释PRRSV(10^(5.0) TCID_(50)/mL~2.5×10^(2.0) TCID_(50)/mL)的最低检测限为5×10^(2.0) TCID_(50)/mL,对2倍倍比稀释的重组N蛋白(rN,24000 ng/mL~3.75 ng/mL)的最低检测限为15 ng/mL;重复性试验结果显示,同一批次和不同批次试纸条的检测结果均无差异;对不同类型北美型PRRSV株(高致病性株、NADC30-like株、类高致病性株)感染的猪血清检测结果显示,利用该ICS可以从相应猪血清中检测到不同北美型的PRRSV。对采集的108份疑似PRRSV感染的猪肺组织及血清样品分别采用本研究建立的ICS及本研究室建立的PCR方法检测,结果显示,ICS检测的阳性率为37.03%(40/108),PCR检测的阳性率为42.59%(46/108),二者的总体符合率为83.33%。上述结果表明,该方法可以用于我国PRRSV主要流行株及临床样品的检测。本研究首次以同一株MAb分别作为检测抗体和检测线捕获抗体,建立检测PRRSV的乳胶微球ICS,为现地PRRSV流行病学调查及临床快速检测提供了新的技术手段。

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 北美型  N蛋白 免疫层析试纸条  

分 类 号：S852.65]