文献类型：期刊文章

作　　者：王海宁[1,2,3] 刘兴健[3] 高新桃[3] 李轶女[3] 沈兴家[1,2] 张志芳[3] 易咏竹[1,2]

WANG Haining;LIU Xingjian;GAO Xintao;LI Yinv;SHEN Xingjia;ZHANG Zhifang;YI Yongzhu(Jiangsu Key Laboratory of Sericulture Biology and Biotechnology,College of Biotechnology,Jiangsu University of Science and Technology,Jiangsu Zhenjiang 212100,China;Key Laboratory of Sericulture Genetic Improvement,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Institute of Sericulture,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Jiangsu Zhenjiang 212100,China;Biotechnology Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,China)

机构地区：[1]江苏科技大学生物技术学院,江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室,江苏镇江212100 [2]中国农业科学院蚕业研究所,农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室,江苏镇江212100 [3]中国农业科学院生物技术研究所,北京100081

出　　处：《生物技术进展》

基　　金：宁夏回族自治区重点研发计划(2020BFG02017);国家自然科学基金项目(32002236;32072796)。

年　　份：2022

卷　　号：12

期　　号：5

起止页码：754-759

语　　种：中文

收录情况：CAB、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：纳米抗体(nanobody,Nb)作为目前已知的能与目标抗原结合的最小单位抗体,在生物医药、临床研究等方面具有良好的应用前景。根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和性纳米抗体H11-D4基因,将其克隆到pET28a表达载体上后,转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)进行诱导表达,通过镍柱纯化、质谱分析、Western Blot鉴定H11-D4的表达情况并使用中和试验验证其中和活性。研究结果显示,纳米抗体H11-D4可成功在大肠杆菌中表达,最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L^(-1),37℃诱导5 h。H11-D4抗体的分子量大小约为17.9 kD,与预测值相符。经镍柱纯化后,产量为25.16 mg·L^(-1)。透析复性后利用TritonX-114快速有效地去除了内毒素,中和试验成功验证了H11-D4的中和活性(IC50)为171.1 nmol·L^(-1),研究结果可为纳米抗体的原核表达和新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的预防及治疗提供基础数据支撑。

关 键 词：纳米抗体  大肠杆菌 新冠病毒  中和试验  

分 类 号：R392-33]