文献类型：期刊文章

作　　者：刘祎璠[1] 赵鑫钰[1] 栾惠雯[1] 刘晓丽[1] 李尊岭[1]

LIU Yifan;ZHAO Xinyu;LUAN Huiwen;LIU Xiaoli;LI Zunling(Department of Biochemistry and Molecular Biology,School of Basic Medicine,Shandong Tumor Immunotherapy Research Innovation Team,Binzhou Medical University,Yantai 264003,Shandong,P.R.China)

机构地区：[1]滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室,山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队,山东烟台264003

出　　处：《滨州医学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(81872332,82070225,82150101)。

年　　份：2022

卷　　号：45

期　　号：4

起止页码：241-247

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的研发靶向免疫球蛋白超家族成员9(IGSF9)的特异阻断型单克隆抗体,并验证该抗体的功能。方法将带有His标签的IGSF9细胞外结构域(IGSF9 extracellular domain,IGSF9-ECD)克隆到pcDNA3.1(-)的表达载体上,转染HEK293细胞,亲和层析获得IGSF9-ECD-His蛋白,应用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting进行蛋白鉴定。应用IGSF9-ECD-His蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠4次,ELISA和流式细胞仪检测小鼠抗血清效价。分离小鼠脾脏细胞,与小鼠多发性骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,ELISA和流式细胞仪筛选阳性克隆,并进一步筛选亚克隆细胞,制备靶向IGSF9的单克隆抗体。将IGSF9抗体加入到T细胞和THP-1细胞共培养体系中,检测上清中IFN-γ和TNF-α水平。结果IGSF9-ECD-His蛋白条带单一,分子量与预期相一致。在T细胞培养体系中加入该蛋白,显著抑制T细胞增殖。IGSF9-ECD-His蛋白免疫小鼠后,小鼠抗血清效价为1∶364500,而且抗血清能够显著逆转THP-1对T细胞的增殖抑制。本研究获取了64株克隆阳性细胞株,其中有6株能够用于流式细胞仪检测。本研究选择了阻断效应最好的5C3母克隆制备单克隆抗体,流式细胞仪和T细胞共培养结果筛选后,选择了阻断效应最好的5C3-1A4作为IGSF9单克隆抗体(anti-IGSF9),该抗体能够显著逆转IGSF9对T细胞的增殖抑制,并促进IFN-γ和TNF-α的分泌。结论本研究成功制备了IGSF9单克隆抗体,而且该抗体能够显著逆转IGSF9对T细胞增殖抑制。

关 键 词：免疫抑制受体  IGSF9  单克隆抗体 免疫治疗

分 类 号：R34[基础医学类]