文献类型：期刊文章

作　　者：张可[1,2] 王小玉[3] 黄淑莹[1,2] 夏佳敏[1,2] 黄四洲[2,4]

Zhang Ke;Wang Xiaoyu;Huang Shuying;Xia Jiamin;Huang Sizhou(School of Basic Medicine,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China;Key Laboratory of Development and Regeneration of Sichuan Province,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China;School of Pharmacy,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China;Department of Human Anatomy,Histology and Embryology,School of Basic Medicine,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China)

机构地区：[1]成都医学院基础医学院,成都610500 [2]成都医学院发育与再生四川省重点实验室,成都610500 [3]成都医学院药学院,成都610500 [4]成都医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室,成都610500

出　　处：《成都医学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(No:32070805);四川省科技厅中央引导地方科技发展专项基金(No:2021ZYD0074);四川省科技厅运用基础研究项目(No:2020YJ0384);成都医学院研究生科研创新基金(No:YCX2021-12)。

年　　份：2022

卷　　号：17

期　　号：4

起止页码：416-420

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶(amd 1)突变体,并运用聚合酶链式反应(PCR)技术对突变的碱基位点设计特异性引物,以建立快速鉴定短片段缺失的方法。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼amd1突变体;运用整胚原位杂交技术分析AMD1在野生型(WT)和amd1纯合子斑马鱼胚胎中的表达;根据突变体的突变位点设计鉴定引物,用PCR和琼脂糖凝胶电泳检测,并使用二代测序技术验证。结果斑马鱼amd1突变体构建成功;受精后24 h,在WT斑马鱼胚胎中AMD1主要在头部、眼睛、体节及内胚层区域表达,而在amd1纯合子斑马鱼胚胎中AMD1的表达明显降低。运用amd 1-screen-(3)-5′引物进行PCR时,在WT斑马鱼胚胎中可获正常条带;而在amd 1纯合子斑马鱼胚胎中未能获得相应条带。结论斑马鱼amd1突变体被成功构建;amd 1-screen-(3)-5′被确定为最佳鉴定引物。

关 键 词：斑马鱼 腺苷甲硫氨酸脱羧酶  短片段缺失  突变体 快速鉴定  

分 类 号：Q95-33]