文献类型：期刊文章

作　　者：黄欣媛[1] 邹礼平[1] 范红波[2]

Huang Xinyuan

机构地区：[1]湖北工程学院湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心,湖北孝感432000 [2]湖北职业技术学院医学基础部,湖北孝感432000

出　　处：《江苏农业科学》

基　　金：湖北省教育厅科研项目(编号:Q20172704)。

年　　份：2022

卷　　号：50

期　　号：15

起止页码：57-62

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为构建能表达串联豆类活性肽PA1b(peaalbumin 1 subunitb)基因的重组大肠杆菌,并进行诱导表达和产物纯化。通过合成PA1b基因,采用同尾酶技术构建1~4拷贝数的串联PA1b基因,分别克隆至pET32a(+)原核表达载体上,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,亲和层析纯化融合蛋白,肠激酶切除融合标签和切开串联体,获得单体PA1b肽。结果显示,大肠杆菌转化子中的重组质粒pET32a(+)-nPA1b(n=1~4)经PCR及测序验证正确,经1mmol/LIPTG25℃诱导8h,均能以包涵体形式表达出重组融合蛋白。SDS-PAGE分析结果表明,串联拷贝数越多,融合蛋白中PA1b含量越高。Ni-NTA亲和纯化得到高纯度的4拷贝串联PA1b融合蛋白,经肠激酶充分酶切、超滤浓缩后获得重组PA1b多肽。获得了表达1~4拷贝串联PA1b基因的重组大肠杆菌,并通过酶解4拷贝PA1b融合蛋白制备了重组PA1b,为多拷贝法制备PA1b肽奠定基础。

关 键 词：PA1b  重组基因表达  多拷贝基因  原核表达

分 类 号：S188]