文献类型：期刊文章

作　　者：徐昊[1] 孙瑾[1] 张冲[1] 王菁华[1]

Xu Hao;Sun Jin;Zhang Chong;Wang Jinghua(Department of Neurobiology,Neurobiology Key Laboratory,Harbin Medical University,Harbin 150081,China)

机构地区：[1]哈尔滨医科大学基础医学院神经生物学教研室,哈尔滨150081

出　　处：《国际免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81671234);黑龙江省自然科学基金(LH2020H013)。

年　　份：2022

卷　　号：45

期　　号：2

起止页码：119-123

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建跨膜蛋白(transmembrane protein,TMEM)240慢病毒载体,并在人神经母细胞瘤细胞中表达。方法提取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的RNA,逆转录成cDNA并作为模板,聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)扩增TMEM240的CDS序列,与pLVX-EGFP-N1载体连接,转化、验菌送公司测序,pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒与慢病毒包装质粒共转染293Ta细胞,收取上清,感染SH-SY5Y,嘌呤霉素筛选,获得表达TMEM240的SH-SY5Y细胞,将感染pLVX-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞作为对照组,感染pLVX-TMEM240-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞为实验组。通过共聚焦显微镜、实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,Real-time PCR)和Western blot检测细胞中TMEM240表达。结果测序结果显示pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒构建成功;共聚焦显微镜下,表达TMEM240的细胞内出现点状绿色荧光;Real-time PCR及Western blot结果表明细胞内TMEM240表达。结论成功构建TMEM240慢病毒载体,慢病毒在基因和蛋白水平均引起TMEM240表达升高。

关 键 词：跨膜蛋白240  慢病毒载体 人神经母细胞瘤细胞

分 类 号：R739.4]