文献类型：期刊文章

作　　者：王万义[1] 袁益琳[1] 李琳[1] 王盈[1] 戴一凡[1] 杨海元[1]

WANG Wanyi;YUAN Yilin;LI Lin;WANG Ying;DAI Yifan;YANG Haiyuan(Jiangsu Key Laboratory of Xenotransplantation,College of Basic Medicine,Nanjing Medical University,Nanjing,Jiangsu Province,211166,China)

机构地区：[1]南京医科大学基础医学院,江苏省异种移植重点实验室,南京211166

出　　处：《陆军军医大学学报》

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81970164)。

年　　份：2022

卷　　号：44

期　　号：13

起止页码：1349-1355

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的利用成簇的规律间隔短回文重复序列和相关蛋白9(clustered regular interval short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)的PIN1基因,以构建PIN1基因敲除长白猪胎儿成纤维细胞系。方法对人和猪的PIN1基因进行同源性分析。利用在线工具设计2个靶向猪PIN1基因第二个外显子区的sgRNAs,并克隆至pX330骨架质粒中。将构建成功的打靶质粒和Neomycin抗性质粒共转染至PFFs中,用G418药物筛选出抗性单细胞克隆,测序鉴定其基因型并从转录和翻译水平鉴定PIN1的表达。结果同源性分析显示人和猪PIN1蛋白的氨基酸序列一致性和相似性均为98%,二者三维结构的均方根偏差(RMSD)值为0.014。获得15个PIN1基因敲除的纯合单克隆细胞系,并且证实PIN1蛋白在翻译水平被完全敲除。结论利用双sgRNAs引导的CRSIPR/Cas9系统在PFFs中高效实现PIN1基因的双等位基因敲除,成功建立PIN1基因敲除的长白猪胎儿成纤维细胞系。

关 键 词：CRISPR/Cas9  PIN1基因  猪胎儿成纤维细胞  猪疾病模型  

分 类 号：R329.2] R394-33[基础医学类] R394.2