文献类型：期刊文章

作　　者：谢倩[1,2] 李冠霖[2] 李颖[1] 李佳楠[1]

XIE Qian;LI Guanlin;LI Ying;LI Jia’nan(School of Life Sciences,Jianghan University,Wuhan 430056,Hubei,China;Technology Center,Wuhan Hiteck Biological Pharma Co.,Ltd.,Wuhan 430056,Hubei,China)

机构地区：[1]江汉大学生命科学学院,湖北武汉430056 [2]武汉海特生物制药股份有限公司技术中心,湖北武汉430056

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：江汉大学研究生科研创新基金项目(20HG005)。

年　　份：2022

卷　　号：38

期　　号：6

起止页码：2259-2268

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EAPJ、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了更经济高效地制备胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1, IGF-1),本研究采用计算机模拟技术对3种IGF-1融合蛋白进行蛋白质结构预测与分子对接,筛选出酶切最适配的IGF-1融合蛋白表达形式。利用基因工程技术构建并鉴定了IGF-1融合蛋白原核表达载体,并转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,获得重组子;经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达后,对菌体的破菌上清进行亲和层析、脱盐、凝血酶酶切及酶切产物亲和层析纯化得到目的蛋白;通过3T3细胞增殖法建立活性评价体系并对获得的IGF-1进行活性测定。结果显示,构建的IGF-1融合蛋白原核表达载体序列正确,获得的重组子在25℃、0.05 mmol/L IPTG诱导16 h时融合蛋白为可溶性表达,经初步纯化、凝血酶酶切、再次纯化后可获得纯度大于90%的IGF-1目的蛋白,在建立的活性评价体系下测得制备的IGF-1比活为2.47×10^(5)U/mg,与市售标准品接近。本研究建立了一条用于制备IGF-1的完整工艺路线,为IGF-1药物的研制及工业化生产奠定基础。

关 键 词：胰岛素样生长因子-1 虚拟预测  基因重组 活性分析

分 类 号：R914]