文献类型：期刊文章

作　　者：徐文华[1,2] 翁子睿[1,2] 葛婷婷[1,2] 陆雯婷[1,2] 孟诗奇[1,2] 牛长敏[1,2] 郑英[1,2]

XU Wenhua;WENG Zimi;GE Tingling;LU Wenting;MENG Shiqi;NIU Changmin;ZHENG Ying(Institute of Obstetrics,Gynecology and Reproduction,Department of Histology and Embryology,School of Medicine;Jiangsu Key Laboratory of Experimental&Translational Non-coding RNA Research,Yangzhou University,Yangzhou 225001,China)

机构地区：[1]扬州大学医学院妇产与生殖医学研究所,组织学与胚胎学教研室 [2]江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室,江苏扬州225001

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(82071696);江苏省高校自然科学研究重大项目(20KJA310002);扬州大学研究生科研创新计划项目(XKYCX2(M)35);国家级大学生创新创业训练项目(202111117024)。

年　　份：2022

卷　　号：38

期　　号：5

起止页码：452-459

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的制备兔抗小鼠Tubby(Tub)样蛋白2(TULP2)多克隆抗体并检测TULP2蛋白在小鼠睾丸中的表达情况。方法分别将TULP2蛋白编码序列全长和TULP2蛋白含Tub结构域的羧基端(TULP2-C)插入pET-30a(+)质粒中,构建pET-30a(+)-TULP2和pET-30a(+)-TULP2-C原核表达重组质粒。将两种质粒分别转化入大肠杆菌E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核蛋白表达。利用组氨酸(His)融合蛋白纯化柱纯化TULP2和TULP2-C原核蛋白,用梯度浓度的尿素复性。分别以复性后的TULP2和TULP2-C原核蛋白为抗原免疫成年雄性新西兰大白兔,获得两种类型的TULP2多克隆抗体。应用ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法及免疫荧光技术确定自制多克隆抗体的有效性及特异性。结果成功构建了pET-30a(+)-TULP2以及pET-30a(+)-TULP2-C重组质粒,并且通过IPTG诱导,表达出TULP2和TULP2-C原核重组蛋白。ELISA检测两种抗体滴度均达到1∶1000000。Western blot法、免疫荧光染色结果显示,利用TULP2-C原核蛋白为免疫原制备的抗体特异性较差。而利用TULP2全长蛋白为免疫原制备的多克隆抗体可以特异识别成年野生型小鼠睾丸中内源性的TULP2蛋白,而且可用于免疫荧光组织化学染色,结果显示TULP2在成年野生型小鼠的圆形精子细胞及其后变形期的精子细胞中表达。结论应用TULP2全长蛋白为抗原可成功制备兔抗小鼠TULP2多克隆抗体,可同时用于Western blot法及免疫荧光组织化学染色。

关 键 词：Tubby样蛋白2(TULP2)  多克隆抗体 精子发生

分 类 号：R392-33] Q954.434[基础医学类] Q786] R321.1