文献类型：期刊文章

作　　者：周岚[1] 张生贵[2] 胡祖梁[1] 王添贤[1] 岳鹏鹏[1] 于鸿浩[1]

ZHOU Lan;ZHANG Sheng-gui;HU Zu-liang;WANG Tian-xian;YUE Peng-peng;YU Hong-hao(Department of Cell and Genetics,School of Biotechnology,Guilin Medical University,Guilin 541104;Department of Radiology,the Second Affiliated Hospital,Guilin Medical University,Guilin 541199,China)

机构地区：[1]桂林医学院生物技术学院细胞与遗传学教研室,广西桂林541104 [2]桂林医学院第二附属医院放射科,广西桂林541199

出　　处：《基础医学与临床》

基　　金：国家自然科学基金(31860302);广西自然科学基金(2018JJA140455);广西中青年教师能力提升项目(2018KY0399);广西科技计划项目(2019AC20329)。

年　　份：2022

卷　　号：42

期　　号：6

起止页码：857-863

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建靶向小鼠miR let-7a的高效CRISPR/Cas9系统。方法根据小鼠miR let-7a的两个编码位点let-7a-1和let-7a-2的编码序列各设计了两对dual-sgRNAs导向序列,通过sgRNA表达载体的构建、小鼠N2a细胞的共转染、药物筛选、阳性细胞PCR产物测序以及TA克隆测序分析等实验步骤完成了4对dual-sgRNAs导向序列的打靶效力分析。结果所构建的4对打靶载体在细胞中发挥了作用,打靶位点均出现了碱基插入或缺失,药物筛选阳性细胞打靶位点RCR产物Sanger法测序峰图在4个靶点位置均有套峰出现。TA克隆测序结果表明本研究设计的4对dual-sgRNAs导向序列的打靶效率分别为42.10%、62.50%、52.63%和47.37%。结论本研究所设计的4对dual-sgRNAs导向序列均可以有效介导Cas9蛋白切割小鼠miR let-7a,形成突变效应。为后续miR let-7a作用靶点的深入挖掘,阐明其发挥抑癌功能的作用机制提供了依据。

关 键 词：MIRS let-7a  CRISPR/Cas9  基因编辑  肿瘤发生

分 类 号：Q789]