文献类型：期刊文章

作　　者：彭斌[1] 谭文甫[1] 何敏[1] 陶鹏飞[1] 李冉辉[2] 陈斌[1]

PENG Bin;TAN Wen-fu;HE Min;TAO Peng-fei;LI Ran-hui;CHEN Bin(The second affiliated hospital,Department of Trauma orthopedics,Hengyang Medical School,University of South China,Hengyang 421001,Hunan,China;Institute of Pathogen Biology,Hengyang Medical School,University of South China)

机构地区：[1]南华大学衡阳医学院附属第二医院创伤骨科,湖南衡阳421001 [2]南华大学衡阳医学院病原生物学研究所

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：湖南教育厅优秀青年项目(No.20B507和No.19B496);衡阳市自然科学基金项目(No.2020jh042735)。

年　　份：2022

卷　　号：17

期　　号：3

起止页码：288-292

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CSCD、CSCD2021_2022、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 利用生物信息学特性分析金黄葡萄球菌脂蛋白SAOUHSC_02650,并制备其多克隆抗体。方法 从NCBI网站获得SAOUHSC_02650蛋白的氨基酸序列,利用生物信息学软件分析该蛋白的二、三级结构、磷酸化位点及抗原性等理化性质。根据SAOUHSC_02650基因的DNA序列设计特异的PCR引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板扩增SAOUHSC_02650基因,将PCR产物连接到质粒pET28a获得重组质粒pET28a-SAOUHSC_02650,将该质粒转化入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导重组SAOUHSC_02650蛋白的表达。利用Ni^(2+)亲和层析法纯化SAOUHSC_02650蛋白,免疫小鼠,获得特异抗血清并测定其效价。结果 SAOUHSC_02650蛋白共有209个氨基酸,分子质量单位为23.3 ku,含有信号肽,是细菌膜外蛋白。该蛋白二级结构中无规卷曲占60.29%,α螺旋占21.05%,β折叠占11.96%,β转角占6.70%。预测的三级结构可信度和匹配度较低。SAOUHSC_02650蛋白含有16个磷酸化位点,固有无序样结构域和5个B细胞表位。IPTG诱导重组质粒表达SAOUHSC_02650蛋白,纯化后获得了纯度较高的目的蛋白,该蛋白能够诱导小鼠分泌特异性抗体。结论 表达、纯化了有较好特异性的金黄色葡萄球菌脂蛋白SAOUHSC_02650,并制备了高效价的多克隆抗体。

关 键 词：金黄色葡萄球菌 脂蛋白 多克隆抗体 生物信息学

分 类 号：R378.11]