文献类型：期刊文章

作　　者：李元[1] 齐召雄[1] 张富蕊[1] 李欣[1] 张国林[3] 刘宏鹏[1] 郭乐[1] 刘昆梅[2]

LI Yuan;QI Zhao-xiong;ZHANG Fu-rui;LI Xin;ZHANG Guo-lin;LIU Hong-peng;GUO Le;LIU Kun-mei(Provincial Key Laboratory of Clinical Pathogenic Microbiology,School of Clinical Medicine,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China;Breeding Base of State Key Laboratory for Craniocerebral Diseases,Ningxia Medical University,Yinchuan 750021,China;Suzhou Pharmaceutical Testing and Research Center,Suzhou 215000,China)

机构地区：[1]宁夏医科大学临床医学院,宁夏临床病原微生物重点实验室,宁夏银川750021 [2]宁夏医科大学,颅脑疾病国家重点实验室培育基地,宁夏银川750021 [3]苏州市药品检验检测研究中心,江苏苏州215000

出　　处：《生物技术》

基　　金：宁夏高等学校科学研究项目(NGY2020043);国家自然科学基金项目(32070930,82160497);宁夏重点研发计划项目(2020BFG02012);自治区级大学生创新创业训练计划项目(S202110752034);中科院“西部之光”人才培养计划项目,江苏省市场监督管理局科技计划项目(KJ207561)。

年　　份：2022

卷　　号：32

期　　号：2

起止页码：141-145

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：[目的]利用原核表达系统表达幽门螺旋杆菌脂蛋白Lpp20(rLpp20),分离纯化获得重组融合蛋白rLpp20,利用其制备抗rLpp20多克隆抗体,并分析其抗体的特异性。[方法]利用生物信息学软件分析rLpp20的抗原结构;通过拼接引物PCR法,获得幽门螺旋杆菌Lpp20基因序列,将其插入到质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-rLpp20,转入大肠杆菌Arctic Express中;经IPTG诱导表达rLpp20后,超声波裂菌,用Ni-IDA柱亲和纯化获得目的蛋白rLpp20。然后,利用Western Blot鉴定rLpp20与anti-H.pylori和anti-His tag的免疫反应性;最后,脂蛋白重组抗原rLpp20与弗氏佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,制备anti-Lpp20多克隆抗血清,利用ELISA鉴定anti-Lpp20的抗体特异性。[结果]利用生物信息学软件证实rLpp20具有较好的抗原性;重组质粒pCZN1-rLpp20经双酶切和基因测序鉴定,证实rLpp20序列与理论值一致;基因工程菌株pCzn1-rLpp20/Arctic Express可以以可溶形式表达rLpp20,经Ni-IDA亲和层析柱纯化,纯度约达98.2%。Western Blot结果证实:重组抗原rLpp20可特异性与anti-H.pylori和anti-His tag结合。ELISA结果证实:所制备的anti-Lpp20抗血清具有良好的抗体特异性,可特异性识别rLpp20和H.pylori裂解物。[结论]利用E.coli Arctic Express实现了脂蛋白重组抗原rLpp20的可溶性表达,经Ni-IDA柱亲和纯化获得了高纯度rLpp20;脂蛋白重组抗原rLpp20具有良好的免疫反应性和特异性,为进一步研制幽门螺旋杆菌疫苗及相关诊断试剂盒奠定了良好的实验基础。

关 键 词：幽门螺旋杆菌 脂蛋白Lpp20  多克隆抗体 特异

分 类 号：Q784] Q786