文献类型：期刊文章

作　　者：许涛[1,2] 李敏英[2] 王楚彤[2,3] 常先友[4] 钱中清[2] 李柏青[2] 汪洪涛[2,3]

XU Tao;LI Minying;WANG Chutong;CHANG Xianyou;QIAN Zhongqing;LI Baiqing;WANG Hongtao(Department of Clinical Laboratory,School of Laboratory Medicine,Bengbu 233030;Depart me nt of Immunology,Anhui Province Key Laboratory of Immunology in Chronic Diseases,Bengbu 233030;Research Center of Laboratory,Bengbu 233030;Department of Infectious Diseases,The Fifth People's Hospital of Bengbu City,Bengbu 233030,China)

机构地区：[1]蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室,安徽蚌埠233030 [2]蚌埠医学院免疫学教研室,慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室,安徽蚌埠233030 [3]蚌埠医学院检验医学实验中心,安徽蚌埠233030 [4]蚌埠市第五人民医院感染科,安徽蚌埠233030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405);安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0233);蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by51201309)。

年　　份：2022

卷　　号：38

期　　号：1

起止页码：78-83

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。

关 键 词：结核分枝杆菌 脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)  Rv1040c  多克隆抗体

分 类 号：R378.911] R392[基础医学类]