文献类型：期刊文章

作　　者：郝建伟[1] 薛春宜[2] 曹永长[2]

HAO Jianwei;XUE Chunyi;CAO Yongchang(Department of Biological Science and Technology,Jinzhong University,Jinzhong 030600,China;School of Life Sciences,State Key Laboratory of Biocontrol,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510006,China)

机构地区：[1]晋中学院生物科学与技术系,山西晋中030600 [2]中山大学生命科学学院/有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东广州510006

出　　处：《山西农业科学》

基　　金：“十三五”重点研发计划项目(2016YFD0500101)。

年　　份：2022

卷　　号：50

期　　号：5

起止页码：714-719

语　　种：中文

收录情况：JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒。采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(Western blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平。结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOFTOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.008 6μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异。替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生。

关 键 词：猪流行性腹泻病毒(PEDV)  杆状病毒 免疫印迹法 串联式飞行时间质谱  蛋白表达  疫苗  

分 类 号：S858.28]