文献类型：期刊文章

作　　者：刘中静[1,2] 乔里[2] 叶朝阳[2] 杨文秀[1]

LIU Zhongjing;QIAO Li;YE Zhaoyang;YANG Wenxiu(Department of Pathology,School of Clinical Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China;Clinical Medical Research Center,Guizhou Medical University Hospital,Guiyang 550004,Guizhou,China)

机构地区：[1]贵州医科大学临床医学院病理学教研室,贵州贵阳550004 [2]贵州医科大学附属医院临床医学研究中心,贵州贵阳550004

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：贵州省卫生健康委科学技术基金项目(gzwjkj2019-1-172)。

年　　份：2022

卷　　号：38

期　　号：3

起止页码：1173-1182

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EAPJ、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为鉴定Opsin3(OPN3)的糖基化位点,通过使用衣霉素(tunicamycin)以及N-糖酰胺酶F(PNGase F)处理发现OPN3存在糖基化修饰;通过预测以及蛋白质氨基酸位点点突变鉴定OPN3的糖基化位点;利用SNAP标签蛋白构建了SNAP-Opsin3(SNAP-OPN3)重组蛋白,使用SNAP-OPN3重组蛋白进行糖基化修饰对OPN3功能影响的研究。在表达SNAP-OPN3重组蛋白后,使用SNAP-tag的反应底物SNAP-Surface;549以及SNAP-Cell;OregonGreen;通过荧光共聚焦显微镜观察OPN3以及OPN3糖基化位点突变体是否能够成熟转运至细胞膜。结果表明,OPN3的N82位点为OPN3的糖基化位点;SNAP标签不影响OPN3功能的正常发挥;使用SNAP反应底物可以清楚地观察到糖基化位点突变的OPN3不能正常转运至细胞膜。本研究首次鉴定了OPN3的糖基化位点,并构建了SNAP-OPN3重组蛋白,发现SNAP标签并不影响OPN3的成熟转运,并利用SNAP底物验证了糖基化修饰影响OPN3蛋白的成熟转运。

关 键 词：Opsin3  糖基化修饰  SNAP 蛋白成熟  

分 类 号：R341[基础医学类]