文献类型：期刊文章

作　　者：吕旭阳[1] 孙江川[1] 董玥[1] 胡林峰[1] 钱颖[1] 范春雷[1] 田男[1]

LYU Xuyang;SUN Jiangchuan;DONG Yue(First Institute of Molecular Medicine,School of Life Science,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,China)

机构地区：[1]浙江中医药大学生命科学学院分子医学研究所,杭州310053

出　　处：《浙江中医药大学学报》

基　　金：浙江省自然基金探索项目(LY20H280005);国家自然科学基金青年项目(81602624)。

年　　份：2022

卷　　号：46

期　　号：1

起止页码：40-49

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：[目的]探讨miR-3175在胶质瘤细胞中的表达,以及对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。[方法]采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测胶质瘤细胞与人正常胶质细胞中miR-3175的表达水平。向胶质瘤细胞株中转染miR-3175 mimics和inhibitors后,采用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测各组胶质瘤细胞增殖能力的变化,以Transwell实验对细胞迁移能力进行评估,流式细胞术检测细胞凋亡。使用miRTarBase和TargetScan预测软件对miR-3175的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统、免疫印迹法和Real-time qPCR分析miR-3175和sineoculis同源异型盒同源物5(sineoculis homeobox homologue 5,SIX5)的相互作用。通过生物信息学与免疫印迹法分析SIX5在胶质瘤中的表达;将pCDNA3.4-SIX5、pCDNA3.4-SIX5+miR-3175 mimics和miR-3175mimics分别转染到胶质瘤细胞,以MTT法、Transwell实验和流式细胞术检测miR-3175及其靶基因SIX5对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。[结果] Real-time qPCR结果表明,胶质瘤细胞中miR-3175基因表达水平明显低于人正常胶质细胞组,呈低表达(P<0.01);细胞体外转染实验表明,上调miR-3175能够显著抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),能够通过将胶质瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导其凋亡(P<0.05,P<0.01);生物信息学软件预测结果显示SIX5可能是miR-3175的潜在靶基因,免疫印迹法、荧光素酶报告基因和Real-time qPCR结果进一步证明SIX5与miR-3175的表达呈负相关(P<0.01)。细胞体外转染实验结果发现,转染pCDNA3.4-SIX5后,胶质瘤细胞的增殖和迁移能力增加(P<0.05,P<0.01),凋亡率下降(P<0.05,P<0.01),而且可以削弱miR-3175对胶质瘤恶性生物学行为的抑制作用。[结论] miR-3175在胶质瘤细胞中显著低表达,并抑制胶质瘤的恶性生物学行为,可能的

关 键 词：miR-3175  胶质瘤 细胞增殖 细胞凋亡  细胞周期 sineoculis同源异型盒同源物5  增殖 迁移

分 类 号：R331]