文献类型：期刊文章

作　　者：张春梅[1] 贾建磊[1] 谢雯[1] 任昊[1] 张怀霞[1] 张莹莹[1] 陈倩[2]

ZHANG Chunmei;JIA Jianlei;XIE Wen;REN Hao;ZHANG Huaixia;ZHANG Yingying;CHEN Qian(College of Agriculture and Animal Husbandry,Qinghai University,Xining 810016,China;Laboratory Management Office of Qinghai University,Xining 810016,China)

机构地区：[1]青海大学农牧学院,西宁810016 [2]青海大学实验室管理处,西宁810016

出　　处：《畜牧兽医学报》

基　　金：青海省科技厅应用基础研究(2020-ZJ-735)。

年　　份：2021

卷　　号：52

期　　号：12

起止页码：3413-3425

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了深入探究HSP 27基因在藏羊卵泡发育过程中的作用,本研究选择健康的(3~4岁)经产藏母羊6只,屠宰获得卵巢组织进行藏羊HSP 27基因克隆,利用生物信息学方法分析HSP 27基因CDS区序列,构建HSP 27基因过表达及沉默载体,分离培养藏羊卵巢颗粒细胞,将构建的载体按不同分组进行细胞转染试验即空白组、过表达载体组、沉默载体组、阴性对照组,每组设3个复孔。显微镜观察各转染组培养0、24、48、72 h的细胞形态变化及细胞计数,RT-PCR检测各转染组HSP 27、GDF 9、BMPR-1B、Erβ基因mRNA表达量。结果,试验成功克隆藏羊HSP 27基因,其CDS序列长度为618 bp,编码203个氨基酸。试验成功构建藏羊HSP 27基因过表达及沉默载体;将构建的载体转染至卵巢颗粒细胞,随着培养时间的递增各转染组间细胞形态发生改变,过表达载体组细胞由长梭状逐渐变为不规则多边形,细胞核变形分解,沉默载体组细胞周边伪足伸出减少,细胞皱缩大量凋亡;细胞计数结果显示,转染后培养72 h时,沉默载体组细胞数量极显著低于其他3组(P<0.01),过表达载体组细胞数量显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,过表达载体组细胞HSP 27基因mRNA表达量极显著高于空白组(P<0.01),沉默载体组细胞HSP 27基因mRNA表达量极显著低于阴性对照组(P<0.01),过表达载体组细胞的GDF 9、BMPR-1B、Erβ基因mRNA表达量均极显著高于空白组(P<0.01),沉默载体组细胞Erβ基因mRNA表达量极显著低于阴性对照组(P<0.01)。由此可初步推测,当HSP 27基因过表达时能够促进颗粒细胞增殖分化,当沉默HSP 27基因时可能会触发颗粒细胞凋亡进而影响卵泡发育,以上研究成果可为HSP 27基因在藏羊卵泡发育过程中的功能研究奠定试验基础。

关 键 词：藏羊 热休克蛋白27 基因克隆  序列分析  载体构建  卵泡发育

分 类 号：S826.2]