文献类型：期刊文章

作　　者：潘静[1,2] 孟凯[2] 秦晓冰[1]

Pan Jing;Meng Kai;Qin Xiaobing(College of Veterinary Medicine,Qingdao Agricultural University/Shandong Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine,Qingdao 266109,China;Institute of Poultry Research,Shandong Academy of Agricultural Sciences,Jinan 250100,China)

机构地区：[1]青岛农业大学动物医学院/山东省预防兽医学重点实验室,山东青岛266109 [2]山东省农业科学院家禽研究所,山东济南250100

出　　处：《山东农业科学》

基　　金：山东省自然科学基金项目(ZR2021MC060);财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系项目。

年　　份：2021

卷　　号：53

期　　号：11

起止页码：100-105

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失。为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4的ELISA方法。根据禽腺病毒4型SDJN0105株Fiber-2基因的核苷酸序列,经序列优化后合成1 440 bp基因序列,连入pET-30a(+)载体构建pET-30a(+)-Fiber-2重组质粒,在BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达Fiber-2蛋白,利用亲和层析柱纯化重组Fiber-2蛋白,经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定后,以Fiber-2蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化建立检测禽腺病毒4型抗体的间接ELISA方法。结果表明,获得了以上清形式表达的重组Fiber-2蛋白,Western-Blot鉴定表明重组Fiber-2蛋白具有良好的免疫学活性;重组Fiber-2蛋白的最佳包被浓度为4.0μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶400;该方法特异性好,仅与禽腺病毒4型阳性抗体发生反应,敏感度可达1∶6400;批内和批间重复性变异系数均小于5%;构建的间接ELISA试剂盒在4℃环境下放置12个月仍然有效。本研究建立的禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、保质期长,可用于禽腺病毒4型的监测和流行病学调查。

关 键 词：禽腺病毒4型  Fiber-2蛋白  原核表达 间接ELISA

分 类 号：S852.657]