文献类型：期刊文章

作　　者：汪吉烽[1] 王维维[1] 吴颖慧[1] 罗晨栩[1] 窦瑞玲[1] 高玲[1] 王国芬[4] 莫选荣[2] 罗心静[3]

WANG Jifeng;WANG Weiwei;WU Yinghui;LUO Chenxu;DOU Ruiling;GAO Ling;WANG Guofen;MO Xuanrong;LUO Xinjing(Department of Clinical Medicine,Medical School of Taizhou University,Taizhou 318000,China)

机构地区：[1]台州学院医学院临床系,318000 [2]台州学院医学院护理系,318000 [3]台州学院医学院基础部,318000 [4]台州学院附属中心医院风湿免疫科

出　　处：《浙江医学》

基　　金：浙江省自然科学基金联合基金资助项目(LTY21H100001);浙江省基础公益研究计划项目(LGD20H100002);台州市科技计划项目(1901ky76、1902ky80);国家大学生创新创业项目(202010350054);浙江省大学生科技创新活动计划(2021R436020)。

年　　份：2021

卷　　号：43

期　　号：16

起止页码：1719-1723

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的观察TNF-α对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)自噬和增殖的影响,并进一步通过抑制NF-κB通路来探讨这一影响的作用机制。方法以RASF细胞株MH7A为研究对象,在一阶段实验中,根据5 ng/ml TNF-α处理的时间点不同,将细胞分为6组,即0、3、6、12、24及48 h组。在二阶段实验中,将细胞分为4组,即Bay组:细胞用5μg/ml Bay11-7082处理;TNF-α组:细胞用5 ng/ml TNF-α刺激;Bay+TNF-α组:细胞用5μg/ml Bay11-7082预处理2 h,再用5 ng/ml TNF-α刺激;正常对照(Ctrl)组:细胞不作处理。MTT法检测细胞相对活性;共聚焦显微镜下采用GFP-LC3来示踪自噬形成;Western blot法检测细胞内P-p65、自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3-I(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)以及唯Bcl-2同源-3域蛋白-1(Beclin-1)蛋白表达水平;Real time-PCR法检测细胞内Beclin-1 mRNA表达水平;细胞免疫荧光法检测P-p65在细胞中表达及定位。结果与0 h组相比,12、24、48 h组细胞相对活性均明显升高(均P<0.05)。GFP-LC3-Ⅱ腺病毒转染细胞后,与0 h组相比,TNF-α刺激滑膜细胞后自噬小体形成明显增多,其中24 h组最为明显。与0 h组相比,3、6、12 h组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),6、12、24、48 h组Beclin-1蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05)。与0 h组相比,6、12、24、48 h组Beclin-1 mRNA表达水平均明显升高(均P<0.05)。与TNF-α组相比,Bay+TNF-α组细胞内P-p65蛋白表达及入核明显减少。与Ctrl组比较,Bay组细胞P-p65蛋白的表达水平明显下降,与TNF-α组比较,Bay+TNF-α组细胞P-p65蛋白的表达水平明显下降(均P<0.05)。与Ctrl组比较,Bay组细胞相对活性明显降低(P<0.05);与TNF-α组比较,Bay+TNF-α组细胞相对活性明显降低(P<0.05)。与TNF-α组相比,Bay+TNF-α组细胞自噬小体明显减少。与Ctrl组比较,Bay组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平均明显下降(均P<0.05);与TNF

关 键 词：类风湿性关节炎  肿瘤坏死因子Α 核因子-ΚB 自噬 细胞增殖  

分 类 号：R593.22]