文献类型：期刊文章

作　　者：赵艳萌[1] 马秀娟[1] 张怡[1] 靳晓飞[1] 高维娟[1]

Zhao Yanmeng;Ma Xiujuan;Zhang Yi;Jin Xiaofei;Gao Weijuan(Hebei Key Laboratory of Chinese Medicine Research on Cardio-Cerebrovascular Diseases,College of Basic Medicine,Hebei University of Chinese Medicine,Shijiazhuang 050091,China)

机构地区：[1]河北中医学院基础医学院,河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室,石家庄050091

出　　处：《神经解剖学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81873180);河北省自然科学基金(H2019423074,H2020423236);河北省高等学校科学技术研究青年基金(QN2019160);河北中医学院优秀青年教师基础研究计划(YQ2019006);河北省研究生创新资助项目(CXZZBS2020146)。

年　　份：2021

卷　　号：37

期　　号：4

起止页码：405-410

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD2021_2022、普通刊

摘　　要：目的:优化新生大鼠皮层神经元提取、培养的方法,以获得高纯度并且生长状态良好的神经元,为神经系统的体外研究提供实验技术。方法:取新生24 h内的SD大鼠皮层组织,通过单次消化法、分步消化法两种不同的消化方法制备单细胞悬液,并以3种不同接种密度铺板,采用Neurobasal-A培养基+2%B27+0.5 mmol/L L-谷氨酰胺的体系进行培养。通过台盼蓝染色计数的方法计数两种消化方法得到的单细胞悬液中总细胞数和活细胞数,并计算细胞成活率。采用分步消化法制备单细胞悬液,用倒置显微镜观察不同密度接种后的神经元培养至7 d的生长状态,并观察以适宜密度接种的神经元培养1~7 d的生长状态。分别用神经元核抗原(NeuN)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)两种神经元标志物鉴定神经元纯度。结果:分步消化法得到的细胞数量及细胞成活率均明显高于单次消化法(P <0.01);以5×105细胞/孔的密度接种细胞得到的神经元生长状态良好,密度适宜,形成的突触网络丰富而均匀;神经元培养1~7 d,胞体逐渐增大,突触逐渐伸长,直到第7 d,神经元胞体立体饱满、折光性强,形成均匀密集的突触网络;经鉴定,培养的神经元纯度可达95%以上。结论:分步消化法提取神经元、接种密度为5×105细胞/孔的培养稳定、高效,得到的神经元纯度高、生长状态好,可作为神经系统疾病体外研究的良好细胞模型。

关 键 词：皮层神经元 原代培养 纯度鉴定 新生大鼠

分 类 号：R338]