文献类型：期刊文章

作　　者：孙天瑶[1] 蒋时枫[2] 徐沁[2] 刘俊岭[1] 党素英[1] 樊雪梅[1]

SUN Tian-yao;JIANG Shi-feng;XU Qin;LIU Jun-ling;DANG Su-ying;FAN Xue-mei(Department of Biochemistry and Molecular Cell Biology,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200025,China;Department of Bioengineering,School of Life Science and Biotechnology,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China)

机构地区：[1]上海交通大学生物化学与分子细胞生物学系,上海200025 [2]上海交通大学生命科学技术学院生物工程系,上海200240

出　　处：《上海交通大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金(81970123);上海交通大学医学院高水平地方高校创新团队(SSMU-ZDCX20180101)。

年　　份：2021

卷　　号：41

期　　号：9

起止页码：1133-1141

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EMBASE、IC、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的·制备以内源性凝血途径中关键的凝血因子Ⅸa(coagulation factorⅨa,FⅨa)为靶点的单克隆抗体,并研究其抗栓功能及作用机制。方法·通过免疫小鼠、杂交瘤技术、单克隆抗体细胞表达纯化技术,制备高纯度的抗FⅨa单克隆抗体;通过酶联免疫吸附测定筛选与FⅨa具有高亲和力的单抗,利用活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶原时间(prothrombin time,PT)评估单抗的抗栓效果;然后利用发色底物法检测其对FⅨa酶活性的影响;采用计算机模拟蛋白-蛋白对接的方法预测抗体与FⅨa相互作用可能的结合位点,并通过竞争实验(间接通过发色底物法)对这一结合位点进行验证。结果·制备得到1种高亲和力抗FⅨa的单克隆抗体FⅨa-4;虽然它不影响PT和FⅨa的酶活性,但可显著延长APTT至88.8 s,是对照组(25.5 s)的3.5倍,并且具有浓度依赖性。蛋白-蛋白对接预测结果发现,FⅨa-4不直接与FⅨa的底物催化位点结合,而是占据了FⅨa和FⅧa的结合区域。竞争实验进一步验证了上述结果,FⅨa-4以剂量依赖的方式抑制FⅩa的生成,FⅨa-4的浓度达到400 pmol/L即可使FⅩa的生成几乎完全被抑制,而FⅧa可纠正抗体的抑制作用达到近50%。结论·获得抗FⅨa的单抗FⅨa-4;FⅨa-4与FⅧa竞争性结合FⅨa阻碍了FⅧa-FⅨa复合物形成,阻断FⅩ向FⅩa的转化,该抗体主要通过抑制内源性凝血途径发挥抗栓作用。

关 键 词：凝血因子Ⅸa  单克隆抗体  活化部分凝血活酶时间 酶活性  凝血因子Ⅷa  抗栓作用

分 类 号：R34[基础医学类]