文献类型：期刊文章

作　　者：陈修月[1] 周文锋[1] 何庆[1] 苏冰[1] 邹亚文[1]

CHEN Xiu-yue;ZHOU Wen-feng;HE Qing;SU Bing;ZOU Ya-wen(College of Veterinary Medicine,Hunan Agricultural University,Hunan Provincial Key Laboratory of Protein Engineering in Animal Vaccines,Research&Development Center for Animal Reverse Vaccinology of Hunan Province,Changsha 410128,China)

机构地区：[1]湖南农业大学动物医学院,兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心,长沙410128

出　　处：《中国生物工程杂志》

年　　份：2021

卷　　号：41

期　　号：7

起止页码：42-49

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:利用大肠杆菌原核表达系统制备噬菌体Qβ VLPs,验证其自组装能力,纯化后免疫动物以确定其免疫原性,同时制备兔多克隆抗体验证其在哺乳动物细胞中内化能力。方法:合成pET-28-Qβ -CP质粒,利用大肠杆菌原核表达系统制备Qβ VLPs,通过蔗糖密度梯度离心纯化VLPs,将经凝胶层析柱Sephacryl S-400纯化的Qβ VLPs用透射电镜观察颗粒形态;纯化后的Qβ VLPs加入或不加入佐剂分别免疫新西兰兔,获得血清后用Protein G纯化得到兔多克隆抗体,通过Western blot确定制备的兔多克隆抗体特异性,并利用间接免疫荧光法对Qβ VLPs的细胞内化能力进行鉴定。结果:制备并获得纯度较高的Qβ VLPs,通过透射电镜观察到大量直径约为28 nm的颗粒;Western blot结果表明制备的兔多克隆抗体能特异性识别Qβ VLPs,且在免疫实验中加入佐剂与不加入佐剂分别免疫动物,对抗体水平的影响不显著。间接免疫荧光法结果表明Qβ VLPs在哺乳动物细胞中具有内化能力。结论:成功制备Qβ VLPs为后续研发以噬菌体Qβ VLPs为载体的相关疫苗奠定基础。

关 键 词：噬菌体QΒ 病毒样颗粒 多克隆抗体 细胞内化  

分 类 号：Q819[生物工程类]