文献类型：期刊文章

作　　者：严珮[1,2] 梁大焱[1,2] 许文豪[1,2] 薛璐[1,2] 于孟飞[1,2] 沈金花[1,2] 刘庆华[1,2] 彭勇波[1,2]

YAN Pei;LIANG Da-Yan;XU Wen-Hao;XUE Lu;YU Meng-Fei;SHEN Jin-Hua;LIU Qing-Hua;PENG Yong-Bo(Institute of Medical Biology,College of Life Sciences,South-Central University for Nationalities,Wuhan 430072,China;Hubei Provincial Key Laboratory of Plant Protection and Utilization of Characteristic Resources in Wuling Mountain,South-Central University for Nationalities,Wuhan 430072,China)

机构地区：[1]中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,武汉430072 [2]中南民族大学武陵山区特色资源植物保护与利用湖北省重点实验室,武汉430072

出　　处：《生理学报》

基　　金：supported by the National Natural Science Foundation of China (No.31371307);the Fundamental Research Funds for the Central Universities of South-Central University for Nationalities (No.CZZ21005)。

年　　份：2021

卷　　号：73

期　　号：3

起止页码：482-490

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：S100钙结合蛋白A9 (S100 calcium binding protein A9, S100A9)参与多种炎症反应及肿瘤细胞的迁移和侵袭调控等生物学过程。本研究目的是利用CRISPR/Cas9技术构建S100A9基因编辑小鼠,为探讨该基因生物学功能提供动物模型。根据S100A9基因序列构建针对外显子2和3的单链小向导RNA(smallguideRNA,sgRNA),体外转录后,通过显微注射将Cas9mRNA和候选sgRNA混合物注射到小鼠受精卵中,体外培养获得早期胚胎并移植到代孕小鼠,所获F0小鼠经PCR鉴定和基因测序鉴定其基因型。F0小鼠进一步与野生型C57BL/6小鼠测交获得F1杂合子小鼠,再通过F1小鼠自交获得纯合子后代,并利用real-timePCR、Western blot及免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)等方法验证S100A9表达和分布情况;构建鸡卵清白蛋白(ovalbumin from chicken egg white, OVA)激发的过敏性哮喘模型,HE染色观察小鼠肺组织病理变化。结果显示,本方法成功敲除S100A9基因2、3外显子2 492 bp,并获得能稳定遗传的S100A9^(-/-)小鼠。S100A9基因在野生型小鼠的肺和脾脏中高表达,而在S100A9^(-/-)小鼠肺和脾脏中未检测到S100A9 mRNA和蛋白的表达;在表型方面,S100A9^(-/-)小鼠在生长、繁殖及发育方面未表现出明显的缺陷,但在OVA处理条件下,相较于野生型小鼠,S100A9^(-/-)小鼠肺部表现出明显加重的炎症表型,且支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中嗜酸性粒细胞的占比显著升高。以上结果表明,本研究成功构建了S100A9基因编辑小鼠新品系,并初步证实S100A9功能缺失加重哮喘小鼠气道炎症,为研究S100A9基因功能提供了新的小鼠模型。

关 键 词：CRISPR/Cas9  S100A9 基因编辑  小鼠

分 类 号：R332] Q78[基础医学类]