文献类型：期刊文章

作　　者：荣娜[1] 康超[1] 孙薇[1] 简思杰[1] 伍娜娜[1] 刘祥[1]

RONG Na;KANG Chao;SUN Wei;JIAN Si-jie;WU Na-na;LIU Xiang(Chinese-German Joint Institute for Natural Product Research,College of Biological Sciences and Engineering,Shaanxi University of Technology,Shaanxi Hanzhong 723001,China)

机构地区：[1]陕西理工大学生物科学与工程学院,中德天然产物研究所,陕西汉中723001

出　　处：《西南农业学报》

基　　金：国家外国专家局项目(GDT20186100426);陕西理工大学人才项目(SLGQD1803);陕西省教育厅科学研究计划项目(17JK0137)。

年　　份：2021

卷　　号：34

期　　号：6

起止页码：1359-1366

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CSCD、CSCD_E2021_2022、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。【方法】采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L_(9)^(3~4)正交实验确定其最佳诱导表达条件,通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化OmpK蛋白;Western blot检测抗血清特异性与效价,ELISA检测OmpK蛋白抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;Western blot分析OmpK蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结果】OmpK为亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构呈桶状,在气单胞菌属间同源性较高,进化相对保守;成功构建OmpK表达菌株,并获得较高纯度的OmpK蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度为0.5 mmol/L,28℃诱导8 h;Western blot验证OmpK蛋白抗血清特异性较好,且效价达到1∶1600,ELISA显示OmpK蛋白抗血清与嗜水气单胞菌存在体外相互作用;Western blot发现OmpK蛋白可通过表达下调实现抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结论】原核表达的OmpK蛋白,可刺激机体产生特异性抗体,与嗜水气单胞菌存在体外相互作用。此外,OmpK蛋白可有效抵抗鱼血浆对嗜水气单胞菌的杀菌作用。本研究为嗜水气单胞菌OmpK蛋白的免疫作用研究与疫苗的开发奠定基础。

关 键 词：嗜水气单胞菌 外膜蛋白OmpK  多克隆抗血清  抗原性 血浆杀菌作用  

分 类 号：Q71]