文献类型：期刊文章

作　　者：于德斌[1,2] 曹存[1] 徐晓静[3] 于力[1] 常继涛[1]

YU De-bin;CAO Cun;XU Xiao-jing;YU Li;CHANG Ji-tao(Division of Livestock Infections Disease,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150069,China;Research and Development Department,Harbin Veken Biotechnology Co.,Ltd.,Harbin 150069,China;College of Veterinary Medicine,Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot 010010,China)

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队,黑龙江哈尔滨150069 [2]哈尔滨维科生物技术有限公司研发部,黑龙江哈尔滨150069 [3]内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特010010

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：内蒙古自治区科技重大专项“牛腹泻疾病防控关键技术与标准化操作规程示范推广”(2020ZD0006)。

年　　份：2021

卷　　号：43

期　　号：4

起止页码：399-404

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2021_2022、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为建立检测牛轮状病毒(BRV)快速特异的荧光定量RT-PCR方法,本研究针对BRV NSP5基因设计了一对特异性引物经PCR扩增目的片段,并克隆于pCI载体作为重组质粒标准品(pCI-NSP5),经优化反应条件,建立了基于NSP5基因的BRV荧光定量RT-PCR方法,并对其进行了特异性、敏感性及重复性试验。结果显示,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法最佳引物浓度为10μmol/L,模板为2μL,退火温度为58℃;特异性试验结果显示,该方法除对BRV的检测结果为阳性外,对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒的检测结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品的最低检测限为12拷贝/μL,对BRV的最低检测限为1×102TCID50/反应;批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。利用该方法检测30份BRV接种犊牛的粪便样品,结果 25份呈阳性,而利用VP7基因的常规RT-PCR和病毒分离方法检出的阳性样品分别为20份和25份,表明本研究建立的检测方法的敏感性高于VP7基因的常规RT-PCR方法,而与病毒分离方法的符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的BRV NSP5基因荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以用于BRV的快速检测、病原流行病学调查以及疫苗免疫攻毒试验的病毒载量定量等研究。

关 键 词：牛轮状病毒 NSP5基因  荧光定量RT-PCR

分 类 号：S852.65]