文献类型：期刊文章

作　　者：任慧[1] 杨恒[2] 胡飞环[3] 易嘉敏[4] 黎诚耀[1] 王文敬[1]

Ren Hui;Yang Heng;Hu Feihuan;Yi Jiamin;Li Chengyao;Wang Wenjing(Department of Transfusion Medicine,College of Laboratory Technology and Biotechnology,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China;Department of Blood Transfusion,Zhujiang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510280,China;Department of Blood Transfusion,Guangdong Provincial People's Hospital,Guangzhou 510080,China;Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510400,China)

机构地区：[1]南方医科大学检验与生物技术学院输血医学系,广东广州510515 [2]南方医科大学珠江医院输血科,广东广州510280 [3]广东省人民医院输血科,广州510080 [4]广州中医药大学,510400

出　　处：《中华地方病学杂志》

基　　金：国家重点研发计划(2017YFD0500300);南方医科大学2017年度"科研启动计划"(CX2017N007);南方医科大学2018年度省级大学生创新创业训练计划(201812121114)。

年　　份：2021

卷　　号：40

期　　号：6

起止页码：448-453

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、EMBASE、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的观察布鲁菌外膜蛋白(OMP)16脂化型(L16)和非脂化型(U16)对成骨细胞的毒力效应。方法利用大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统制备L16和U16重组蛋白,并使用镍柱纯化。采用成组设计,利用小鼠成骨细胞系(MC3T3细胞)分别与L16和U16重组蛋白共孵育(L16、U16刺激组),以布鲁菌脂多糖(LPS)刺激物为阳性对照(LPS对照组),未加任何刺激的细胞作为阴性对照,孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力;离心收集培养细胞上清,生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放率,评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用;进一步使用AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率,以及通过免疫印迹法(WB)检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果L16刺激组细胞活力[(56.16±1.63)%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[(97.02±1.44)%、(98.64±0.90)%,P均<0.01],LDH释放率[(84.64±0.96)%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[(34.82±3.41)%、(26.75±1.95)%,P均<0.01]。AnnexinⅤ-PE/7-AAD染色结果显示,L16刺激组细胞凋亡率为(46.45±2.19)%,而其余组均<1%。WB结果显示,L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3,而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。结论L16能诱导成骨细胞的凋亡,使成骨细胞的增殖受到抑制,而U16的作用不明显,具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。

关 键 词：布鲁杆菌属  外膜蛋白 成骨细胞系 细胞活力 乳酸脱氢酶 细胞凋亡  

分 类 号：R378.5]