文献类型：期刊文章

作　　者：方晓婷[1] 吴依依[1] 余婷婷[1] 忻诗君[1] 娄利琴[1] 李晨[2] 高洪昌[2] 周燕[1] 楼永良[1] 李祥[1]

FANG Xiaoting;WU Yiyi;YU Tingting;XIN Shijun;LOU Liqin;LI Chen;GAO Hongchang;ZHOU Yan;LOU Yongliang;LI Xiang(Wenzhou Key Laboratory of Sanitary Microbiology,Key Laboratory of Laboratory Medicine,Ministry of Education,School of Laboratory Medicine and Life Sciences,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;School of Pharmacertical Sciences,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China)

机构地区：[1]温州医科大学检验医学院、生命科学学院,检验医学教育部重点实验室,温州市环境卫生微生物检验重点实验室,温州325035 [2]温州医科大学药学院,温州325035

出　　处：《中国细胞生物学学报》

基　　金：温州科技局医疗卫生项目(批准号:Y20180070);浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目(批准号:2020R413080、2019R413036);浙江省医学技术一流学科(A类)和国家科技重大专项子课题(批准号:2018ZX10201001-009)资助的课题。

年　　份：2021

卷　　号：43

期　　号：5

起止页码：979-990

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD_E2021_2022、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：该文探讨了肠道微生物具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)通过调节代谢产物丁酸钠(NaB)对结直肠癌(CRC)发生发展的影响及其分子机制。提取临床组织RNA和蛋白,RT-qPCR和Western blot检测肿瘤组织与正常/癌旁组织Cdk1的mRNA及蛋白表达,同时检测具核梭杆菌的mRNA的相对水平,并分析其与Cdk1的相关性。具核梭杆菌处理结直肠癌细胞24 h后检测周期相关蛋白Cdk1和P21的表达水平,核磁共振检测培养基上清差异代谢物。不同浓度差异代谢物NaB处理结直肠癌细胞DLD-1、SW480、HCT116,使用MTT和克隆形成实验检测DLD-1、SW480、HCT116增殖能力。流式细胞术检测NaB对结直肠癌细胞SW480周期阻滞位点,Western blot检测周期相关蛋白Cdk1、P21、C-myc的表达水平。流式细胞术检测NaB处理后结直肠癌细胞SW480凋亡率变化情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-Casepase3、Cleaved-PARP、Bcl-2的表达水平。采用MTT实验检测不同MOI具核梭杆菌作用结直肠癌细胞4、8、24 h后对其增殖能力的影响。将结直肠癌细胞与具核梭杆菌共培养24 h,Western blot检测相关蛋白Cdk1、c-myc、Cleaved-Caspase3的表达情况。结果显示,在肿瘤组织中Cdk1蛋白水平和mRNA水平均明显高于正常/癌旁组织(P<0.05),并且Cdk1与具核梭杆菌mRNA表达水平存在一定相关性。具核梭杆菌处理结直肠癌细胞DLD-1和HCT116后,Western blot结果显示Cdk1和P21蛋白水平上升。核磁共振结果表明,菌处理组代谢模式与未处理组存在明显差异,主要代谢物NaB相对含量明显低于未处理组(P<0.01)。使用1 mmol/L NaB处理结直肠癌细胞系DLD-1、SW480、HCT11624 h后,细胞生存率分别为(89.18±1.92)%、(85.07±0.61)%、(83.59±2.18)%,且随着药物浓度升高,药物对细胞活性的抑制率逐步上升。同时,经1 mmol/L NaB处理后,DLD-1、HCT116和SW480细胞的克隆形成率相比于对照分别下降了(20.07±4.85)%、(36.47±5.31)%、(31.13±5.22)%。�

关 键 词：具核梭杆菌 结直肠癌 CDK1 增殖  凋亡  

分 类 号：R735.34]