文献类型：期刊文章

作　　者：屈蓉[1,2] 吴康[2] 吴娟[2] 范小勇[1,2] 吕建新[1]

QU Rong;WU Kang;WU Juan;FAN Xiao-yong;LYU Jian-xin(School of Laboratory,Medicine and Life Science,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,Zhejiang Province,China;不详)

机构地区：[1]温州医科大学检验医学院、生命科学学院,浙江温州325035 [2]上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心,上海201508

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(31771004);“十三五”传染病重大专项(2018ZX10302301);上海市科委项目(19XD1403100,20Y11903400)。

年　　份：2021

卷　　号：34

期　　号：5

起止页码：566-570

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2021_2022、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的原核表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)早期分泌蛋白MPT64,并初步评估其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法PCR扩增Mtb标准菌株H37Rv mpt64基因,克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pET28a-mpt64,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,进行重组蛋白的原核诱导表达及纯化。将600μg纯化的MPT64蛋白经皮下多点免疫新西兰大白兔,隔周免疫1次,共4次,末次免疫2周后,耳缘静脉采血分离血清,ELISA法检测血清效价,Western blot法鉴定抗原特异性。收集44例TB确诊患者(TB组)和36名健康对照人群[HC(healthy control)组]血清,间接ELISA法检测血清中MPT64抗原的特异性IgG、IgA抗体水平,抗原对照为Gro ES和Ag85A。结果重组表达质粒pET28a-mpt64经双酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组MPT64蛋白主要以包涵体形式存在,部分以可溶性形式存在,经Ni2+-NTA亲和纯化后,纯度可达90%,蛋白浓度约2.0 mg/m L;MPT64兔多克隆抗血清效价达1∶2048000,纯化的MPT64蛋白可与其发生反应,在相对分子质量约24000处可见特异性蛋白条带;TB组血清中MPT64抗原特异性IgG和IgA水平均显著高于HC组(P<0.05),而Gro ES、Ag85A抗原特异性IgA和IgG水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组MPT64蛋白具有较好的血清学诊断效能,可作为TB血清学早期诊断的候选抗原之一。

关 键 词：结核分枝杆菌 MPT64 免疫学诊断 血清学诊断

分 类 号：R378.912]