文献类型：期刊文章

作　　者：范一灵[1] 王淑娟[1] 李琼琼[1] 胡颖[2,3] 宋明辉[1] 秦峰[1,4] 刘浩[1] 杨美成[1]

FAN Yiling;WANG Shujuan;LI Qiongqiong;HU Ying;SONG Minghui;QIN Feng;LIU Hao;YANG Meicheng(Key Laboratory for Testing Technology of Pharmaceutical Microbiology,Shanghai Institute for Food and Drug Control,National Medical Products Administration,Shanghai 201203,China;National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 102629,China;School of Public Health,Zunyi Medical University,Zunyi 563006,China;Institutes of Biomedical Sciences,Department of Chemistry,Fudan University,Shanghai 200438,China)

机构地区：[1]国家药品监督管理局药品微生物检测技术重点实验室,上海市食品药品检验研究院,上海201203 [2]中国食品药品检定研究院,北京102629 [3]遵义医科大学公共卫生学院,贵州遵义563006 [4]复旦大学化学系,生物医学研究院,上海200438

出　　处：《食品科学》

基　　金：“十三五”国家重点研发计划重点专项(2018YFC1603900)。

年　　份：2021

卷　　号：42

期　　号：10

起止页码：297-304

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EAPJ2020、EI、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),开发产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)的等温检测方法,结合圆盘式微流控芯片快速检测目标微生物。以stx1和stx2基因为靶点,设计和筛选适宜的RPA检测引物和探针序列,验证了19株STEC菌株(含9种stx基因亚型)和21株非STEC菌株,并采用人工污染的牛肉样品对集成化的微流控芯片进行评价。筛选出检测stx1和stx2基因的高特异性引物、探针组合,与美国农业部微生物实验室技术指南中STEC定量聚合酶链式反应(real-time polymerasechainreaction,real-timePCR)方法相比,目标基因检测的包容性和排他性均为100%。荧光RPA微流控芯片法在20 min内可同时进行32个反应,可检测STEC菌体灵敏度为9.5×10^(3)CFU/mL。根据GB 4789.6—2016《食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》的规定经增菌培养后在人工污染牛肉样品中可检测1 CFU/25 g的STEC污染,方法的相对正确度和相对检出水平均为100%。本研究开发了一种荧光RPA微流控芯片检测方法,可检测常见stx基因亚型STEC菌株,操作简单、反应速度快,适用于STEC的高通量快速检测。

关 键 词：重组酶聚合酶扩增  微流控芯片 产志贺毒素大肠埃希菌 stx基因  快速检测  

分 类 号：R917]