文献类型：期刊文章

作　　者：牛倩[1] 田野[1] 吴明凯[1] 张宇豪[1] 陈晨[1] 颜晓梅[1]

NIU Qian;TIAN Ye;WU Ming-Kai;ZHANG Yu-Hao;CHEN Chen;YAN Xiao-Mei(Departmentof Chemical Biology,MOE Key Laboratory of Spectrochemical Analysis&Instrumentation,Key Laboratory for Chemical Biology of Fujian Province,College of Chemistry and Chemical Engineering,Xiamen University,Xiamen 361005,China)

机构地区：[1]厦门大学化学化工学院化学生物学系,谱学分析与仪器教育部重点实验室,化学生物学福建省重点实验室,厦门361005

出　　处：《分析化学》

基　　金：国家自然科学基金项目(Nos.21934004,21627811);国家基础科学人才培养基金项目(No.J1310024)资助。

年　　份：2021

卷　　号：49

期　　号：5

起止页码：733-742

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、EBSCO、EI、IC、JST、RCCSE、SCIE、SCOPUS、UPD、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：细菌囊泡(Bacterial membrane vesicles,BMVs)是细菌在生长过程中分泌的纳米尺度脂质小泡,其携载核酸、蛋白质,特别是毒力因子和免疫调节因子等,进行种间、种内以及与宿主的信息交流和物质交换。BMVs不仅影响多种生物过程,而且在疫苗和抗癌药物研发方面显示出重要的应用价值。但是,由于BMVs具有高度的个体差异性、粒径微小且内容物稀少,其纯化和表征均面临严峻挑战。基于本研究组自行研制的纳米流式检测装置(Nano-flow cytometer,nFCM)可在单颗粒水平对纳米粒子进行高灵敏、高通量分析的独特优势,本研究结合差速离心和密度梯度离心对BMVs进行分离纯化,建立了BMVs的纯度、浓度及粒径分布的单颗粒水平定量表征方法。采用nFCM对密度梯度离心后密度层中BMVs的纯度进行快速评估,可获得纯度>90%的BMVs样品。此外,基于以上单颗粒表征方法,本研究发现,革兰氏阴性菌大肠杆菌(E.coli)O157∶H7与革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)分泌BMVs的浓度、密度和粒径存在较大差异,从相同数目细菌中提取到的E.coli O157∶H7 BMVs的浓度比S.aureus BMVs的浓度高一个数量级;E.coli O157∶H7 BMVs的密度约为1.10 g/mL,粒径分布中位值为83.5 nm,而S.aureus BMVs的密度约为1.06 g/mL,粒径分布中位值为64.9 nm。本研究建立了一种在单颗粒水平对BMVs纯度、浓度及粒径分布进行表征的方法。nFCM有望为BMVs更深层次的生物学功能研究提供有力的技术支持。

关 键 词：细菌囊泡  纳米流式检测仪  密度梯度离心 纯度 浓度  粒径分布

分 类 号：Q935]