文献类型：期刊文章

作　　者：荣娜[1] 简思杰[1] 孙薇[1] 康超[1] 伍娜娜[1] 刘祥[1]

RONG Na;JIAN Sijie;SUN Wei;KANG Chao;WU Nana;LIU Xiang(Chinese-German Joint Institute for Natural Product Research,College of Biological Sciences and Engineering,Shaanxi University of Technology, Hanzhong Shaanxi 723001,China)

机构地区：[1]陕西理工大学生物科学与工程学院,中德天然产物研究所,陕西汉中723001

出　　处：《西北农业学报》

基　　金：国家外国专家局项目(GDT20186100426);陕西省科技厅重点研发计划项目(2020LSFP2-38);陕西理工大学人才项目(SLGQD1803)。

年　　份：2021

卷　　号：30

期　　号：3

起止页码：333-342

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、CSCD、CSCD2021_2022、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：研究鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白P5的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。采用生物信息学方法分析P5的理化性质;分子克隆构建P5表达菌株并确定其最佳诱导表达条件,包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化P5蛋白,并免疫小鼠制备P5抗血清;Western blotting检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟P5抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;P5抗血清被动免疫红鲫,攻毒以评价P5蛋白的免疫保护功能;Western blotting分析P5蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。结果表明:P5蛋白在气单胞菌属间同源性较好,进化保守。成功克隆表达、纯化P5蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度0.5 mmol/L,32℃诱导8 h。Western blotting验证P5抗血清特异性较好,效价达到1∶1600,ELISA显示P5抗血清与嗜水气单胞菌存在识别作用,表明P5蛋白具有较好的免疫原性与抗原性。被动免疫显示P5抗血清对红鲫的免疫保护率为显著性的56%,具有良好的免疫保护作用。Western blotting发现P5蛋白可通过表达下调有效抵抗鱼血浆的杀菌作用,表明其可能与细菌抗血浆杀菌有关。综上,嗜水气单胞菌外膜蛋白P5是一种保护性抗原,有望作为防治嗜水气单胞菌感染的疫苗候选成分。

关 键 词：嗜水气单胞菌 外膜蛋白P5  多克隆抗血清  血浆杀菌作用  被动免疫

分 类 号：Q71]