文献类型：期刊文章

作　　者：柏晓辉[1] 刘雪[2] 朱雯培[1] 俞晨忻[1] 滕芸芸[1] 周颖[1]

BAI Xiao-hui;LIU Xue;ZHU Wen-pei;YU Chen-xin;TENG Yun-yun;ZHOU Ying(College of Life and Environment Science,Huangshan University,Huangshan,China 245041;Center for Infectious Disease Research,School of Medicine)

机构地区：[1]黄山学院生命与环境科学学院,安徽黄山245041 [2]清华大学医学院传染病研究中心

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31900122);安徽省教育厅高校自然科学基金重点项目(No.KJ2019A0611);安徽省自然科学基金项目(No.1908085QC124);大学生创新创业训练项目(No.201910375013,S201910375073,S201910375020)。

年　　份：2020

卷　　号：15

期　　号：11

起止页码：1268-1271

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的克隆表达肺炎链球菌中一个潜在β-内酰胺酶基因SP_0010并进行晶体学研究和生物信息学分析,以期阐明该蛋白的生理功能,为其疫苗研究奠定基础。方法从数据库中查询获得肺炎链球菌TIGR4菌株基因SP_0010及其编码蛋白Sp_0010的序列信息,利用生物信息学分析软件对Sp_0010的生物学功能进行预测和分析;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导已构建的菌株Rosetta(DE3)/pET28a(+)-SP_0010中目标蛋白Sp_0010表达,经Ni2+柱亲和层析、分子筛纯化及浓缩后用晶体初筛试剂盒进行初筛,对筛出的蛋白Sp_0010晶体进行优化。结果基因SP_0010编码422个氨基酸残基,生物信息学分析显示其编码蛋白Sp_0010具有信号肽,是一种表达后分泌至细胞外的亲水性蛋白;同源建模显示Sp_0010具有N端和C端两个结构域,且C端结构域形成具有"β-内酰胺酶折叠类似"结构;抗原表位分析表明Sp_0010含有7个优势抗原表位,具有免疫原性;晶体筛选显示Sp_0010的初试结晶条件为25%polyethylene glycol 3350,0.2mol/L MgCl2,0.1mol/L Hepes,pH 7.5。结论蛋白Sp_0010可在大肠杆菌中重组表达,表达蛋白可形成晶体,这为研究其结构与功能奠定了基础。

关 键 词：肺炎链球菌 Β-内酰胺酶 生物信息学 晶体学

分 类 号：R378.12]