文献类型：期刊文章

作　　者：马文君[1,2] 滕琳[2] 田顺利[3] 郭校燕[2] 王培培[2] 郑春阳[2] 卫宏远[1]

MA Wenjun;TENG Lin;TIAN Shunli;GUO Xiaoyan;WANG Peipei;ZHENG Chunyang;WEI Hongyuan(Tianjin University,Tianjin 300350 China;Robustnique Corporation Ltd.,Tianjin 300384,China;Health and Medical Department,General Hospital,Tianjin Medical University,Tianjin 300052,China)

机构地区：[1]天津大学,天津300350 [2]天津强微特生物科技有限公司,天津300384 [3]天津医科大学总医院保健医疗部,天津300052

出　　处：《食品工业科技》

年　　份：2021

卷　　号：42

期　　号：2

起止页码：70-75

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为实现人源磷脂酶A2的原核异源可溶表达,并对其进行纯化和初步的酶学性质分析。通过检索NCBI确定人源PLA2(PLA2G10),并将其构建于载体pET28a+上,并以麦芽糖结合蛋白(MBP)为促溶标签,成功构建载体pET28a-MBP-PLA2,转化E.coli BL21(DE3)后,经PTG低温诱导表达,SDS-PAGE鉴定后,确认其在上清中大量表达。根据蛋白的性质建立了一整套蛋白纯化工艺,包括Q柱洗脱,硫酸铵盐析,Phenyl柱纯化,Amylose柱纯化,分离纯化获得重组酶,SDS-PAGE测定该酶纯度大于90%。以卵磷脂为底物,酸碱滴定法测定其比活为127.04 U/mg,纯化得率48.8%,纯化倍数为10.3倍。酶学性质研究表明,该酶的分子量为56.5 kDa,最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0,是钙离子依赖酶,对PC亲和能力最强,Km值为12.2 mmol/L,V(max)为0.19 mmol/L/min。本试验建立的磷脂酶A2的异源表达、纯化体系,为其进一步的理论和工业研究奠定了基础。

关 键 词：人磷脂酶A2  载体构建  异源可溶表达  蛋白纯化  活性测定  

分 类 号：TS201.2]