文献类型：期刊文章

作　　者：贺静[1] 邓陶然[2] 李长勇[1] 李豫峰[2] 武栋成[1,3] 吴明富[4]

HE Jing;DENG Taoran;LI Changyong;LI Yufeng;WU Dongcheng;WU Mingfu(Department of Biochemistry and Molecular Biology,School of Basic Medical Sciences,Wuhan University,Wuhan 430072;Reproductive Medicine Center,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology;Hamilton Biotechnology,Co.,LTD,Wuhan 430075;Department of Obsterics and Gynecology,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China)

机构地区：[1]武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系,湖北武汉430072 [2]华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖中心 [3]武汉汉密顿生物科技股份有限公司研发中心,湖北武汉430075 [4]华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,湖北武汉430030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：武汉市科学技术局应用基础前沿项目(2019020701011436);武汉市科学技术局科技成果转化专项(2019030703011513)。

年　　份：2020

卷　　号：36

期　　号：10

起止页码：897-902

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的比较四种方法所提取的人脐带间充质干细胞细胞外囊泡(EV)的效率。方法收集人脐带间充质干细胞的培养基上清液,通过差速离心法(方法A)、超滤结合差速离心法(方法B)、超滤结合聚乙二醇沉淀法(方法C)、超滤结合水两相系统法(方法D)提取EV。利用二辛可宁酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒检测各组EV的总蛋白浓度,Western blot法检测EV表面标志物凋亡关联基因2相互作用蛋白X(Alix)、CD9与阴性对照钙连蛋白(calnexin),透射电镜检测EV的形态,纳米颗粒跟踪分析检测EV的粒径分布与颗粒数。结果以上四种方法提取的EV蛋白含量分别为(1.92±1.77)μg/μL、(18.10±1.07)μg/μL、(6.33±1.02)μg/μL、(36.48±23.13)μg/μL。A、B、C三种方法所分离的EV的CD9、Alix均呈阳性,其中方法C的表达量最低;阴性蛋白calnexin均呈阴性。方法D所得EV检测CD9、Alix、calnexin均呈现阴性。A、B、C三种方法提取的EV颗粒数分别为0.85×10^11/mL、0.63×10^11/mL、1.83×10^11/mL,且粒径分布均符合细胞外囊泡的粒径范围。透射电镜检测A、B、C三种方法所提EV均有典型的杯托状膜结构。结论超滤结合差速离心法可应用于对EV需求量大的实验。若EV需求量小,则建议直接使用差速离心法,降低EV破碎的风险。

关 键 词：人脐带间充质干细胞 细胞外囊泡  超速离心

分 类 号：R392-33] G304[基础医学类]