文献类型：期刊文章

作　　者：何萌[1] 张国林[2] 李元[1] 韩学波[1] 刘宏鹏[1] 李欣[1] 钱玲玲[1] 刘昆梅[3] 郭乐[1]

HE Meng;ZHANG Guo-lin;LI Yan;HAN Xue-bo;LIU Hong-peng;LI Xin;QIAN Ling-ling;LIU Kun-mei;GUO Le(Provincial Key Laboratory of Clinical Pathogenic Microbiology,School of Clinical Medicine,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China;Suzhou Pharmaceutical Testing and Research Center,Suzhou 215000,China;Breeding Base of State Key Laboratory for Craniocerebral Diseases,Ningxia Medical University,Yinchuan 750021,China)

机构地区：[1]宁夏医科大学临床医学院,宁夏临床病原微生物重点实验室,银川750021 [2]苏州市药品检验检测研究中心,苏州215000 [3]宁夏医科大学颅脑疾病国家重点实验室培育基地,银川750021

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金(32070930、81760359);宁夏重点研发计划(2020BFG02012);宁夏自然科学基金(2019AAC03079、2020AAC03152);江苏省市场监督管理局科技计划(KJ207561)资助项目。

年　　份：2020

卷　　号：40

期　　号：11

起止页码：21-27

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:利用原核表达和蛋白质纯化技术获得高纯度的幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原(rCagL),利用其制备anti-CagL多克隆抗体,并分析抗体的特异性。方法:通过生物信息学软件分析rCagL的抗原结构;利用PCR长片段DNA合成技术合成不含有信号肽序列的幽门螺杆菌致病岛CagL基因,将其插入表达质粒p Czn1中,构建重组质粒pCzn1-rCagL。然后,将pCzn1-rCagL转入大肠杆菌Arctic Express中,经IPTG诱导表达后,通过Ni-IDA镍离子亲和层析纯化重组抗原rCagL,利用Western blot鉴定rCagL与His标签抗体和Anti-H.pylori抗体的免疫反应性;最后,通过rCagL辅以弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,制备anti-CagL多克隆抗血清,通过ELISA方法分析抗血清的特异性。结果:生物信息学软件表明重组抗原rCagL具有较好的抗原性质;重组质粒pCzn1-rCagL经双酶切和基因测序等技术鉴定,证实rCagL核苷酸序列与理论序列完全一致;基因工程菌株pCzn1-rCagL/Arctic Express在低温11℃条件经IPTG诱导表达。SDS-PAGE实验结果证实:rCagL可实现相对高效地可溶性蛋白表达,可溶性蛋白约占包涵体的62.07%。经Ni-IDA亲和层析柱纯化,可获得高纯度rCagL,纯度约为96.6%。Western blot结果证实:重组抗原rCagL可特异性与His标签抗体和Anti-H.pylori抗体结合。ELISA结果证实:经rCagL免疫小鼠制备的多克隆抗体anti-CagL可特异性识别rCagL和H.pylori裂解物,具有较高的抗体特异性。结论:重组抗原rCagL在低温条件下可实现可溶性表达,经纯化可获得高纯度抗原蛋白;rCagL具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体具有较好的免疫特异性,为发展H.pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。

关 键 词：幽门螺杆菌 致病岛  CagL蛋白  特异性抗体

分 类 号：Q819[生物工程类]