文献类型：期刊文章

作　　者：李祎[1] 王先梅[1] 杨旭[1] 邓均华[3] 王飞[1] 刘群[1,2] 许建海[1] 刘晶[1,2]

LI Yi;WANG Xianmei;YANG Xu;DENG Junhua;WANG Fei;LIU Qun;XU Jianhai;LIU Jing(National Animal Protozoa Laboratory,College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China;Key Laboratory of Animal Epidemiology of the Ministry of Agriculture,College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China;Luoyang Taipu Biological Engineering,INC.,Luoyang 471000,China)

机构地区：[1]中国农业大学动物医学院,国家动物寄生原虫实验室,北京100193 [2]中国农业大学动物医学院,农业部动物流行病学重点实验室,北京100193 [3]洛阳普泰生物技术有限公司,洛阳471000

出　　处：《畜牧兽医学报》

基　　金：国家重点研发计划(2017YFD0501304)。

年　　份：2020

卷　　号：51

期　　号：12

起止页码：3101-3110

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种人畜共患机会性致病原虫,其急性感染可导致宿主产生明显的临床症状和严重的病理损伤。弓形虫致密颗粒蛋白1(dense granuleprotein 1,GRA1)是一种良好的诊断抗原,也是弓形虫急性感染的标志物循环抗原(circulating antigen,CAg)的重要组分。本研究利用TgGRA1单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法,为急性弓形虫感染的检测提供依据。将免疫GRA1-His的小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。选择其中一种单抗与HRP标记后的鼠源GRA1多抗配对,建立1种双抗体夹心ELISA方法,检测人工感染弓形虫的猪和小鼠血清样品,并将检测效果与巢式PCR(nest PCR,nPCR)和商品化试剂盒进行比较。结果筛选到4株杂交瘤细胞,腹水效价为106~107,亚型均为IgG1;IFA和Western blot结果显示,4株单抗均具有良好的反应性和特异性。选择1G2单抗和HRP标记多抗配对,建立了循环抗原双抗体夹心ELISA方法,最低能够检测到血清中1.563 ng·mL-1 GRA1抗原,或者100 ng·mL-1 ESA。该方法与nPCR相比具有较高的一致性,较市售商品化试剂盒更为准确可靠。本研究第1次将GRA1抗原作为急性弓形虫感染的诊断指标,建立相应的检测方法,成功地在人工感染样品中检测到弓形虫急性感染,可为弓形虫急性感染的诊断提供参考,对临床上急性弓形虫病的治疗有指导意义。

关 键 词：弓形虫急性感染  GRA1单克隆抗体  循环抗原 双抗体夹心ELISA

分 类 号：S852.72]