文献类型：期刊文章

作　　者：董彬[1] 王君[1] 孙静[1] 王报贵[1] 孙春龙[1] 吴涛[1]

DONG Bin;WANG Jun;SUN Jing;WANG Baogui;SUN Chunlong;WU Tao(Shandong Provincial Engineering and Technology Research Center for Wild Plant Resources Development and Application of Yellow River Delta,College of Biological and Environmental Engineering,Binzhou University,Binzhou 256603,China)

机构地区：[1]滨州学院生物与环境工程学院,山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心,滨州256603

出　　处：《生物学杂志》

基　　金：山东省自然科学基金资助项目(ZR2018PC010,ZR2019MH054,ZR2019PH097);山东省重点研发计划资助项目(No.2019GSF107010)。

年　　份：2020

卷　　号：37

期　　号：6

起止页码：23-27

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2019_2020、JST、PROQUEST、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：将Cpf1核酸酶N端166个氨基酸的DNA编码序列克隆至pET-28a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行重组表达,对诱导其表达的IPTG浓度和诱导时间开展条件优化。利用6×His纯化标签得到的重组蛋白作为抗原进行动物免疫,间接ELISA方法测定免疫后抗血清效价达到128000,并经Protein A纯化后得到抗体,Western Blot分析抗体的特异性,结果显示可以特异性识别大肠杆菌中表达的Cpf1(1-166)和Cpf1,为Cpf1在生物体中的检测提供工具,且将为推动CRISPR/Cpf1系统在生物体中的应用奠定良好的实验基础。

关 键 词：CRISPR-Cpf1  大肠杆菌  原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

分 类 号：Q78]