文献类型：期刊文章

作　　者：张延鹏[1] 王晓春[1] 许礼发[2] 张健[3] 张京燕[4] 毛莉蓉[2]

ZHANG Yan-peng;WANG Xiao-chun;XU Li-fa;ZHANG Jian;ZHANG Jing-yan;MAO Lirong(Department of Pathogen Biology,College of Medicine,Anhui University of Science and Technology,Huainan,Anhui,China 232000;Department of Im munology,Medicine College of Anhui University of Science and Technology Huainan,Huainan,Anhui,China 232000;Department of Clinical Medicine,College of Medicine,Anhui University of Science and Technology,Huainan,Anhui,China 232000;Clinical Laboratory,Peace Hospital Affiliated-with Changzhi Medical College)

机构地区：[1]安徽理工大学医学院病原生物学教研室,安徽淮南232000 [2]安徽理工大学医学院免疫学教研室,安徽淮南232000 [3]安徽理工大学医学院临床医学系,安徽淮南232000 [4]长治医学院和平医院检验科

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：安徽省高校自然科学研究重点项目(No.KJ2016A211)。

年　　份：2020

卷　　号：15

期　　号：9

起止页码：1015-1020

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建结核分枝杆菌(Mtb)Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,将克隆片段与质粒pET30b进行连接,构建重组质粒pET30b-Rv1988,以基因工程技术表达并纯化目的蛋白rRv1988。从山西省长治医学院和平医院感染科募集26例符合要求的受试者,采用全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测Rv1988抗原诱导Mtb感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的IFN-γ水平及其差异。其中动物试验设5个组(PBS组、BCG组、DMT组、rRv1988/DMT组及BCG+rRv1988/DMT组),皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度,脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并进行数据分析。结果成功构建了Rv1988基因重组载体,表达并纯化了重组蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对照者[如rRv1988刺激值为(1118±70.53)pg/ml和(207.1±31.58)pg/ml,t=10.21,P<0.01]。经BCG初免后以rRv1988蛋白联合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,诱导产生高水平的特异性IgG抗体及其亚类(F=755.1、326.5和193.1,均P<0.01),IgG2a/IgG1趋向Th1型应答;同时诱导小鼠脾淋巴细胞产生高水平的IFN-γ和TNF-α(F=58.71和131.2,均P<0.05),而IL-2在BCG+rRv1988/DMT组、rRv1988/DMT组和BCG组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论原核表达了rRv1988蛋白,该蛋白能被Mtb感染者的T细胞所识别,并可引发机体产生特异性Th1型细胞免疫应答,表明rRv1988蛋白具有免疫原性,为结核病疫苗的研制奠定了基础。

关 键 词：结核分枝杆菌 Rv1988  原核表达 免疫应答

分 类 号：R378.911]