文献类型：期刊文章

作　　者：王令[1] 任艳艳[1] 郭苗苗[1] 王金萍[1] 杜伟立[1] 郭熠洁[2] 路宏朝[1] 张涛[1]

WANG Ling;REN Yan-Yan;GUO Miao-Miao;WANG Jin-Ping;DU Wei-Li;GUO Yi-Jie;LU Hong-Zhao;ZHANG Tao(Department of Bioengineering,School of Biological Science and Engineering,Shaanxi University of Technology,Hanzhong 723001,Shaanxi,China;Department of Pathogenic Biology and Immunology,School of Basic Medical Sciences,Xi'an Jiaotong University,Xi'an 710061,Shaanxi,China)

机构地区：[1]陕西理工大学生物科学与工程学院生物工程系,陕西汉中723001 [2]西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系,西安710061

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：Supported by Key Research Project of Shaanxi Science and Technology Department (No. 2019NY-097);Shaanxi University of Technology Talent Start-up Fund (No. SLGQD14-02)。

年　　份：2020

卷　　号：36

期　　号：9

起止页码：1080-1089

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：CRISPR/Cas9核酸酶是一种高效和精确的基因组DNA编辑工具。目前,CRISPR/Cas9被开发成一种新型抗菌剂,通过靶向破坏目标基因,例如抗生素耐药基因来诱导细菌死亡。本研究利用CRISPR携带多靶点优势,同时靶向大肠杆菌必需基因gyrA、gyrB和folA,以达到杀菌作用。本设计针对3个内源基因的CRISPR系列载体,分别含有1个、2个或3个靶点。当IPTG诱导Cas9表达后,CRISPR RNA (crRNA)和反式作用CRISPR RNA (trans-activating CRISPR RNA, tracrRNA)复合物募集Cas9切割靶基因,导致细菌死亡。随着crRNA中靶点数量的增加,杀菌效率显著提高。当含有3个靶点的crRNA作用于细菌基因组时,杀菌效率达到99.35%。此外,在存活的大肠杆菌中,crRNA表达质粒的靶序列和直接重复序列发现碱基缺失,而内源靶基因和Cas9基因均未发生突变。最后,该CRISPR系统还应用于其他大肠杆菌实验室菌株和产肠毒素K88菌株,并表现出高效的杀菌作用。我们设计了一种基于CRISPR/Cas9核酸酶的新型抗菌剂,为抗菌剂的研发提供新策略。

关 键 词：CRISPR/Cas9  必需基因 抗菌剂 杀菌作用

分 类 号：Q812[生物工程类]