文献类型：期刊文章

作　　者：陈海云[1]

CHEN Hai-yun(School of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University in Guangzhou, Guangzhou 510006, China)

机构地区：[1]广东药科大学药学院药理系,广州广东510006

出　　处：《中国药理学通报》

基　　金：国家自然科学基金青年基金(No 81803512);广东省自然科学基金博士科研启动项目(No 2018A030310562)。

年　　份：2020

卷　　号：36

期　　号：10

起止页码：1476-1480

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬液,经台盼蓝活细胞计数后接种在预先用多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)包被的培养板中。接种20~24 h后,加入10μmol·L-1的阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C),以及从d 4开始每隔3天加入终浓度5 mmol·L-1的Glucose。借助荧光显微镜及神经元特异性标志物微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)对CGNs细胞进行形态观察及纯度鉴定。结果与原有的胰酶提取方法相比,改进后的CGNs提取方法细胞生长状态良好、突触发育完善、细胞碎片等杂质含量较少,并具有较高存活率及纯度(97%)。结论该方法简便可行,结果稳定,可以为体外神经元的生长发育、轴突再生和神经系统疾病的研究提供有力支持。

关 键 词：小脑颗粒神经元 Tryple Express  阿糖胞苷 提取  β-Ⅲ-tubulin  免疫荧光染色

分 类 号：R-332] R322.81