文献类型：期刊文章

作　　者：许涛[1] 张丽[2] 钱中清[3] 李柏青[3] 汪洪涛[3]

XU Tao;ZHANG Li;QIAN Zhongqing;Li Baiqing;WANG Hongtao(Department of Clinical Laboratory,School of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Research Center of Laboratory Medicine,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Department of Immunology,Anhui Key Laboratory of Infection and Immunity,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China)

机构地区：[1]蚌埠医学院,检验医学院临床检验诊断学教研室,安徽蚌埠233030 [2]蚌埠医学院,检验医学实验中心,安徽蚌埠233030 [3]蚌埠医学院,免疫学教研室,感染与免疫安徽省重点实验室,安徽蚌埠233030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：卫生部重大传染病专项(2012ZX10003006-004);安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405);安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0233);2018年国家级大学生创新创业项目(201810367001)。

年　　份：2020

卷　　号：36

期　　号：6

起止页码：549-554

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、稀释复性与纯化。用纯化PE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot法进行效价及特异性鉴定。结果成功构建pET28a-PE8原核表达载体,ITPG诱导后PE8蛋白在大肠杆菌主要以包涵体的形式表达,复性后纯化PE8蛋白纯度达90%,纯化多克隆抗体效价为1∶430080以上,能与PE8蛋白发生特异性反应。结论大肠杆菌表达的PE8重组蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。

关 键 词：结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白  Rv1040c  多克隆抗体

分 类 号：S852.4+3] R378.91+1[动物医学类]