文献类型：期刊文章

作　　者：李宇恒[1] 邓诚思[1] 关爱伟[1] 宋晓宇[1] 冯艳玲[1] 关奕[1] 曹流[1]

LI Yuheng;DENG Chengsi;GUAN Aiwei;SONG Xiaoyu;FENG Yanling;GUAN Yi;CAO Liu(Institute of Translational Medicine,China Medical University,Shenyang 110122,China)

机构地区：[1]中国医科大学转化医学研究院,沈阳110122

出　　处：《中国医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金(81770001);辽宁省自然科学基金(20180550132);辽宁省教育厅自然科学类基础项目(JC2019040);辽宁省高等学校基本科研项目(LFWK201725)。

年　　份：2020

卷　　号：49

期　　号：7

起止页码：582-585

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2019_2020、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的利用CRISPR/Cas9技术构建靶向PTEN的基因编辑质粒,构建PTEN稳定敲除的人子宫内膜腺癌细胞株KLE,并初步探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响。方法设计靶向人PTEN基因的sgRNA序列,构建puro-cas9-PTENsgRNA质粒,测序验证;将重组质粒转染人子宫内膜腺癌细胞KLE,嘌呤霉素筛选获得PTEN稳定敲除细胞株;用T7E1酶切实验检测切割效率,Western blotting检测PTEN的蛋白表达水平,并检测细胞自噬相关因子LC3、P62的表达水平,检测细胞活性,探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞自噬的调控作用。结果 CRISPR/Cas9系统对KLE细胞基因组中的PTEN进行了切割,并在同源重组时发生了碱基错配,PTEN被成功敲除;PTEN敲除降低了细胞自噬相关因子LC3Ⅰ型向Ⅱ型转化,增加了P62的累积。PTEN敲除的细胞活性增强。结论利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人子宫内膜腺癌细胞中成功敲除PTEN,抑制了人子宫内膜腺癌细胞的自噬水平,为后续研究提供了细胞模型。

关 键 词：PTEN CRISPR/Cas9  细胞自噬

分 类 号：Q28]