文献类型：期刊文章

作　　者：王姗姗[1] 赵会丽[2] 邓舒[3] 梁佳元[3] 王斯[3] 刘昂[4] 谭文彬[4] 薛庆节[4] 杜峰[4]

WANG Shan-shan;ZHAO Hui-li;DENG Shu;LIANG Jia-yuan;WANG Si;LIU Ang;TAN Wen-bin;XUE Qing-jie;DU Feng(Departjnent of Pathology,Institute of Precision Medicine,Jining Medical University;School of Clinical Medicine,Jining Medical University;Department of Pathogen Biology,College of Basic Medical Sciences,China Medical University;Department of Pathogen Biology,College of Basic Medical Sciences,Jining Medical University)

机构地区：[1]济宁医学院精准医学研究院,山东济宁272067 [2]济宁医学院临床医学院 [3]中国医科大学基础医学院病原生物学教研室 [4]济宁医学院基础医学院病原生物学教研室

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：山东省自然科学基金项目(No.ZR2018PH028,ZR2018PH035,2018GSF118137);山东省医药卫生科技发展计划项目(No.2017WS517);济宁医学院青年教师科研扶持基金项目(No.JYFC2018KJ030);济宁医学院国家自然科学基金培育项目(No.JYP201707);济宁医学院贺林院士新医学临床转化工作站科研基金项目(No.JYHL2018MS18);济宁市科技助推新旧动能转换计划项目(No.2017SMNS001)。

年　　份：2020

卷　　号：15

期　　号：6

起止页码：621-626

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAB、CSCD、CSCD2019_2020、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建Flp/FRT位点特异重组系统介导的致死型约氏疟原虫基因条件修饰体系,用于疟原虫红前期基因功能的研究。方法构建含有Flp酶基因序列和FRT标记耐药基因的重组质粒,通过Nucleofector电转技术将线性化质粒转染至约氏疟原虫P.yoelii 17XL。经药物筛选并克隆后,利用PCR和核酸探针杂交进行基因型鉴定。经蚊体内发育,启动Flp酶介导的位点特异重组去除药物筛选基因(hDHFR),并利用PCR技术分析基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组效率。通过检测感染小鼠的发病情况、疟疾血症及生存曲线分析基因工程疟原虫的生物学特性。结果成功构建打靶载体pyUIS4/Flp并重组至UIS4基因的5′调控区,获同源重组疟原虫P.yUIS4/Flp(R),经蚊体内发育获位点特异重组删除药物筛选基因的基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp。PCR和核酸探针鉴定基因工程疟原虫基因型正确。基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组在发育至14d的子孢子内达到近100%的重组效率。与野生型疟原虫比较,小鼠感染后3 d镜下均查见感染红细胞,其内疟原虫形态未见异常,7 d红细胞寄生率达峰值,分别为80.5%和82.7%,疟疾血症及生存曲线均无统计学差异(P>0.05)。结论成功构建基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp,其生物学特性与野生型疟原虫无明显不同,并具有较高的位点特异的重组效率,可用于疟原虫红前期基因功能的研究及减毒活疫苗的研制。

关 键 词：疟原虫,约氏  基因修饰 位点特异重组  

分 类 号：R382.31]