文献类型：期刊文章

作　　者：何刘军[1] 谢永丽[1,2] 岑山[1] 周金明[1,2]

HE Liu-jun;XIE Yong-li;CEN Shan;ZHOU Jin-ming(Department of Immunobiology,Institute of Medicinal Biotechnology,Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College,Beijing 100050,China;Modern Pharmaceutical Innovation Research Center,School of Biochemistry,Zhejiang Normal University,Jinhua 321004,China)

机构地区：[1]中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室,北京100050 [2]浙江师范大学生化学院现代制药创新研究中心,金华321004

出　　处：《中国医药生物技术》

基　　金：国家自然科学基金(81672559)。

年　　份：2020

卷　　号：15

期　　号：3

起止页码：249-254

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统,为抗结肠癌药物筛选提供新的技术手段。方法首先选取细胞系并确定系统的技术参数,构建以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统,设计实验验证筛选系统的有效性;而后将构建的筛选系统初步应用,筛选化合物库Z183593-L1200,并对筛选结果进行验证,验证筛选系统的可行性。结果完成筛选系统构建后,通过筛选系统(in-cell Western blot)测得的Hce8693和T47D细胞的KRAS表达差异与普通Western blot一致,筛选系统测定的siRNA系统的敲低效率与普通Western blot亦一致,筛选系统的有效性得到初步验证。筛选激酶抑制剂化合物库Z183593-L1200后,选取活性最好的化合物PF-04691502进行验证;浓度梯度实验显示,随着PF-04691502浓度升高则KRAS胞内含量降低,KRAS胞内含量对PF-04691502浓度呈梯度依赖性;细胞增殖实验结果显示PF-04691502对Hce8693细胞的半数有效浓度(IC50)为3.546μmol/L,进一步验证了系统的可行性。结论所构建的以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统具有一定有效性和可行性,能够用于以KRAS蛋白为药物靶点的药物高通量筛选,为抗结肠癌的药物研发提供了新的筛选方法。

关 键 词：高通量模型  结肠癌 KRAS 近红外双色激光成像系统  

分 类 号：R965.1]