文献类型：期刊文章

作　　者：杨萍[1,2] 张艳[2] 李微[3] 刘大维[3] 闫慧[3] 褚彦飞[3] 白鹭[3] 谷铁军[1,2] 孙博[1,2]

YANG Ping;ZHANG Yan;LI Wei;LIU Da-wei;YAN Hui;CHU Yan-fei;BAI Lu;GU Tie-jie;SUN Bo(National Engineering Laboratory for AIDS Vaccine,Jilin University,Changchun 130012,Jilin Province,China)

机构地区：[1]吉林大学艾滋病疫苗国家工程实验室,吉林长春130012 [2]吉林大学生命科学学院,吉林长春130012 [3]长春百克生物科技股份公司,吉林长春130012

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：吉林省科技发展计划(20160209016YY)。

年　　份：2020

卷　　号：33

期　　号：3

起止页码：308-311

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2019_2020、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法。方法抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000~5 000 bp和100~1 000 bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验。同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定。结果纯化后DNA样品浓度为47. 5 ng/μL,A260/A280值为1. 86,可作为阳性对照。以100~1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰。该法检测范围为10 pg^10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强。3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均<50 pg。结论本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控制。

关 键 词：地高辛探针杂交  DNA残留  昆虫细胞 重组人肠道病毒71型  病毒样颗粒

分 类 号：Q789]