文献类型：期刊文章

作　　者：王丽花[1] 赵云萍[1] 金珊珊[1] 王教[1] 陈晓燕[1] 闫东升[1]

Lihua Wang;Yunping Zhao;Shanshan Jin;Jiao Wang;Xiaoyan Chen;Dongsheng Yan(State Key Laboratory of Ophthalmology,Optometry and Vision Science,Eye Hospital,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325027,China)

机构地区：[1]温州医科大学附属眼视光医院省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室,325027

出　　处：《中华眼视光学与视觉科学杂志》

基　　金：浙江省自然科学基金(LQ17H120009,LQ15H160014)。

年　　份：2020

卷　　号：22

期　　号：3

起止页码：184-190

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD2019_2020、IC、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:探讨MicroRNA-96(miR-96)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法:实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼(20周)石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和随机序列寡核苷酸链[阴性对照(NC)]通过阳离子脂质体介导转染人眼RPE细胞,采用细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移能力。通过生物信息学及Western blot法确定miR-96作用的靶基因。应用Western blot检测miR-96对细胞增殖迁移相关信号通路蛋白(Akt、ERK)及细胞周期相关蛋白(p-Cdc2、CyclinD2、p-Rb)表达的影响。组间数据比较采用独立样本t检验。结果:miR-96在人眼RPE细胞中有表达。MTS结果显示,转染NC、miR-96后,人眼RPE细胞的相对增殖速率分别为100%、74%±2%,差异有统计学意义(t=42.174,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-96后阻滞在G1期的RPE细胞明显多于转染NC后,且差异有统计学意义(t=-18.444,P=0.003)。Transwell实验结果显示,与转染NC相比,转染miR-96能显著抑制RPE细胞的迁移,差异具有统计学意义(t=6.754,P=0.002)。进而,明确了MITF是miR-96作用的靶基因。Western blot检测结果显示,转染miR-96后细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(t=11.211,P=0.002)、p-Cdc2(t=9.133,P=0.003)、CyclinD2(t=7.542,P=0.005)以及迁移相关信号通路蛋白p-ERK(t=16.699,P<0.001)、p-Akt(t=23.552,P<0.001)的表达水平均降低。结论:miR-96通过作用于靶基因MITF,调控细胞周期和迁移相关蛋白的表达从而抑制人RPE细胞的增殖和迁移。

关 键 词：视网膜色素上皮 microRNA-96  细胞增殖 细胞迁移 MITF

分 类 号：R77]