文献类型：期刊文章

作　　者：张露华[1] 李周勉[1] 唐祎依[1] 蔡云凤[1] 田唯嘉[1] 黄坤[1] 王东亮[1] 王乃东[1] 湛洋[1]

ZHANG Luhua;LI Zhoumian;TANG Yiyi;CAI Yunfeng;TIAN Weijia;HUANG Kun;WANG Dongliang;WANG Naidong;ZHAN Yang(College of Veterinary Medicine,Hunan Agricultural University,Hunan Provincial Key Laboratory of Protein Engineering in Animal Vaccines,Changsha 410128,China)

机构地区：[1]湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室,长沙410128

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》

基　　金：湖南省教育厅重点项目(15A086);湖南省自然科学基金面上项目(2018JJ2177);湖南农业大学2017年青年科学基金项目(17QN10);湖南农业大学“大学生创新性试验计划”项目。

年　　份：2020

卷　　号：0

期　　号：5

起止页码：71-76

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、RCCSE、核心刊

摘　　要：为了能够同时检测猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)和猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV-3),试验根据国内报道的PCV-2和PCV-3毒株全基因序列设计6对特异性引物(P3~P8),并构建标准质粒进行引物特异性试验,然后通过优化扩增条件建立检测PCV-2和PCV-3混合感染的双重PCR方法。最后用PCV-2和PCV-3的感染性克隆同时转染PK-15细胞,盲传5代后用建立的双重PCR方法检测细胞培养液中的病毒核酸。结果表明:构建的PCV-2和PCV-3标准质粒浓度分别为290 ng/μL和380 ng/μL,双重PCR方法的最佳引物组合为P3/P6和P4/P8,最佳DNA聚合酶浓度为0.02 U/μL。使用引物组合P3/P6时,扩增得到的目的片段大小分别为308 bp和608 bp,最佳退火温度为58℃,最佳循环次数为28个;使用引物组合P4/P8时,扩增得到的目的片段大小分别为291 bp和645 bp,最佳退火温度为60℃,最佳循环次数为26个。运用建立好的双重PCR方法评估感染细胞模型,能有效鉴别PCV-2和PCV-3的单一感染和混合感染。说明优化得到的双重PCR检测方法可用于PCV-2和PCV-3的同时检测。

关 键 词：猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型  双重PCR 引物 退火温度 循环次数  

分 类 号：S852.6592]